Microscopia a contrasto di fase per la valutazione dei mutanti dello sviluppo negli streptomiceti

Inizia con piastre di agar contenenti colonie di ceppi selvatici e mutanti di Streptomyces coelicolor, un batterio filamentoso del suolo.

Posizionare un vetrino coprioggetti sterile su una regione di densa crescita di colonie dove i filamenti aerei, che sono filamenti che si estendono sopra la superficie della colonia, sono chiaramente visibili.

Premere delicatamente il vetrino coprioggetti per trasferire i filamenti aerei e le spore associate sulla superficie del vetrino.

Quindi, prendere un vetrino da microscopio con il supporto di montaggio e montare il vetrino coprioggetti con la cellula rivolta verso il basso per preservare le strutture batteriche.

Posizionare il vetrino su un tavolino da microscopio, aggiungere una goccia di olio da immersione sul vetrino coprioggetti e allineare l'obiettivo.

Utilizzando la microscopia a contrasto di fase, acquisisci immagini dei filamenti aerei sia da ceppi selvatici che mutanti.

I filamenti wild-type mostrano spore di dimensioni uniformi e regolarmente distanziate.

Al contrario, i ceppi mutanti mostrano difetti, come filamenti rigonfi, spore irregolari o spore lisate, rivelando differenze fenotipiche nello sviluppo tra il tipo selvatico e i mutant