Rilevamento di patogeni pesci tramite analisi a ripetizione tandem a numero variabile (VNTR)
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Microbiologia
0 visualizzazioni • 3:01 min. • November 28th, 2025
Inizia con una piastra PCR contenente una soluzione denaturante a base di formamide.
Aggiungere gli amplicon PCR diluiti derivati da un batterio patogeno dei pesci in ogni pozzo.
Questi ampliconi contengono ripetizioni tandem a numero variabile marcate fluorescenti (VNTR), sequenze brevi e ripetitive utilizzate come marcatori genetici per l'identificazione batterica.
Sigilla la piastra e la centrifuga per eliminare le bolle d'aria.
Riscalda la piastra in un termociclatore per denaturare i VNTR a doppio filo.
La formamide migliora la separazione dei filamenti e inibisce il ricotturatura.
Raffreddare rapidamente la piastra per stabilizzare il DNA a singolo filamento.
Centrifuga per raccogliere il volume del campione.
Rimuovi la guarnizione e fissa la piastra con un telaio.
Posizionare il tubo capillare ed eseguire l'elettroforesi capillare.
Durante l'elettroforesi, i frammenti di VNTR migrano attraverso il capillare sotto un campo elettrico e si separano per dimensione.
Un laser eccita i tag fluorescenti su ogni frammento, generando segnali codificati a colori.
L'elettroferogramma risultante mostra i modelli di picco VNTR che corrispondono al batterio patogeno.
Dopo la conferma degli amplificator
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