Generazione di un modello murino di malaria cerebrale sperimentale utilizzando sporozoiti derivati da zanzare ospiti

Inizia con un tubo contenente ghiandole salivari di zanzare femmine infettate da Plasmodium berghei , un parassita che causa la malaria.

Distrugge meccanicamente le ghiandole, rilasciando gli sporozoiti, una forma infettiva del parassita nel substrato.

Pellettare le frazioni della ghiandola e i detriti. Raccogli il surnatante contenente sporozoite e iniettalo nella vena della coda di un topo trattenuto.

Gli sporozoiti iniettati viaggiano attraverso il flusso sanguigno e raggiungono il fegato, dove infettano gli epatociti e si moltiplicano, formando merozoiti, una forma invasiva del parassita.

Nel corso del tempo, gli epatociti rilasciano merozoiti nel flusso sanguigno, invadendo i globuli rossi, o globuli rossi.

All'interno dei globuli rossi, i merozoiti si replicano asessualmente, sviluppandosi in forma matura ed esprimendo antigeni derivati dal parassita sulla superficie dei globuli rossi.

Questi antigeni si legano ai recettori endoteliali, compresi quelli nei vasi sanguigni cerebrali, portando al sequestro di globuli rossi infetti e non infetti.

Questo accumulo anomalo di globuli rossi distrugge la barriera emato-encefalica, causando l'accumulo di liquidi nel parenchima cerebrale e lo sviluppo di malaria cerebrale nel topo.

Inizia raccogliendo le zanzare femmine dalla loro gabbia da 17 a 22 giorni dopo il pasto di sangue. Usa una pinza per posizionare 3 o 4 zanzare su un vetrino coperto con una goccia di terreno RPMI freddo. Quindi, posizionare il vetrino sotto un microscopio.

Allunga con cura la zanzara tra la testa e il corpo con una pinza e usa una siringa e un ago per isolare la ghiandola salivare. Quindi, raccogliere le ghiandole salivari dal vetrino aspirandole con una pipetta di vetro e trasferendole in una provetta da centrifuga da 1,5 millilitri. Quindi, utilizzare un piccolo bastoncino di plastica per schiacciare le ghiandole salivari isolate all'interno della provetta da centrifuga per tre minuti al fine di isolare gli sporozoiti dal tessuto delle ghiandole salivari.

Centrifugare per tre minuti a 1.000 volte g a 4 gradi Celsius per purificare gli sporozoiti dal tessuto rimanente. Pipettare il surnatante, che contiene gli sporozoiti, in una nuova provetta da centrifuga e contare gli sporozoiti purificati in un emocitometro Neubauer. Gli sporozoiti mostrano un tipico movimento in senso antiorario.

Successivamente, regolare la concentrazione degli sporozoiti purificati a 10.000 per millilitro aggiungendo soluzione salina tamponata con fosfato. Infine, metti un topo C57BL6 in un sistema di ritenuta e metti la coda in acqua tiepida per visualizzare meglio la vena della coda. Quindi, iniettare un totale di 1.000 sporozoiti, o 0,1 millilitri, nella vena caudale per avviare l'infezione.