Un test basato sulla fluorescenza che utilizza linfociti ingegnerizzati per lo screening di composti immunomodulatori
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:57 min. • July 8th, 2025
Iniziare con una piastra multipozzetto compatibile con la fluorescenza contenente una sospensione di linfociti T transgenici derivati dal topo.
Questi linfociti contengono una proteina fluorescente verde o cassetta di espressione GFP, controllata dal recettore delle cellule T o dall'impegno del TCR con composti immunomodulatori.
Trattare ogni pozzetto con una soluzione contenente composti immunomodulatori con diversi potenziali.
Durante l'incubazione, i composti immunomodulatori interagiscono con i TCR sui linfociti T.
L'interazione del TCR con un composto stimolante innesca l'attivazione della cassetta genica, aumentando l'espressione della GFP.
Al contrario, l'interazione del TCR con un composto inibitorio inibisce la cassetta genica e riduce l'espressione della GFP.
Quindi, sovrapponi le cellule con un colorante fluorescente all'acido nucleico per colorare i nuclei.
Centrifugare la piastra per stabilizzare le celle per una misurazione accurata della fluorescenza.
Al microscopio a fluorescenza, i linfociti T vitali mostrano due segnali di fluorescenza corrispondenti ai nuclei cellulari e alle proteine fluorescenti verdi.
La fluorescenza verde intensificata indica il successo dell
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