Un test di codifica a barre per la caratterizzazione fenotipica e funzionale delle cellule immunitarie
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:42 min. • July 8th, 2025
Iniziare con campioni di prova contenenti cellule immunitarie stimolate e fissate.
La stimolazione induce l'espressione di marcatori specifici nelle cellule, mentre la fissazione preserva i marcatori fenotipici, compresi gli antigeni di superficie cellulare, e i marcatori di stato funzionale, comprese le citochine.
Aggiungere una combinazione unica di anticorpi coniugati con isotopi di metalli pesanti a ciascun campione.
Questa tecnica codifica in modo univoco più campioni, distinguendo ogni campione per la sua combinazione di isotopi di metalli pesanti.
Gli anticorpi si legano a un epitopo comune, codificando a barre tutte le cellule nei campioni.
Combina tutti i campioni con codice a barre in un'unica provetta, per l'elaborazione a valle.
Aggiungere un cocktail di anticorpi coniugati con metallo per colorare gli antigeni della superficie.
Aggiungere un tampone di permeabilizzazione per aumentare la permeabilità della membrana cellulare per la colorazione intracellulare.
Aggiungere un'altra serie di anticorpi metallo-coniugati per colorare le citochine intracellulari.
Il barcoding consente la colorazione e l'acquisizione simultanea dei campioni aggregati tramite citometria di mass
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