JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
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Assumere diluizioni seriali di anticorpi specifici per il citomegalovirus umano, o HCMV.
Dopo l'aggiunta di HCMV, gli anticorpi si legano alla glicoproteina B sull'involucro virale, neutralizzando il virus.
Trasferire la miscela su fibroblasti umani e incubare.
Un complesso di glicoproteine trimeriche sui virus non neutralizzati si lega a specifici recettori cellulari, innescando la fusione della membrana virus-ospite mediata dalla glicoproteina B e rilasciando il nucleocapside contenente DNA genomico all'interno.
Il genoma rilasciato entra nel nucleo, codificando proteine localizzate nel nucleo immediatamente precoce, o IE.
La neutralizzazione degli anticorpi impedisce l'ingresso virale nelle cellule.
Rimuovi i virus non internalizzati. Trattare con etanolo a una temperatura inferiore allo zero per fissare e permeabilizzare le cellule.
Introdurre un anticorpo primario che si lega alle proteine IE.
Aggiungere un anticorpo secondario coniugato con fluorofori che si lega all'anticorpo primario e una colorazione fluorescente che si lega al DNA.
Al microscopio, rileva le cellule con doppia colorazione infettate dal virus. Calcolare la percentuale di cellule infette per determinare la n
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