Immunocolorazione a fluorescenza di fette di organoidi cerebellari

Prendiamo le sezioni fisse di organoidi cerebellari che comprendono tipi distinti di neuroni cerebellari.

Lavare le sezioni nel tampone per rimuovere i residui di materiale di inclusione.

Incubare in glicina per bloccare i siti reattivi residui dalla fissazione, riducendo il legame non specifico durante l'immunocolorazione.

Aggiungere un detergente non ionico per permeabilizzare le cellule.

Lavare con tampone, rimuovendo il detersivo in eccesso.

Ora, asciuga il vetrino. Trasferirlo in una capsula immunocolorante con carta imbevuta di tampone per evitare che i tessuti si secchino.

Applicare una soluzione bloccante che si lega a siti non specifici sui neuroni.

Rimuovere la soluzione bloccante. Incubare con anticorpi primari, che si legano agli antigeni bersaglio all'interno dei neuroni cerebellari.

Lavare con tampone, rimuovendo gli anticorpi non legati.

Incubare con anticorpi secondari legati al fluoroforo per legare gli anticorpi primari legati all'antigene.

Quindi, lavare con tampone, rimuovendo gli anticorpi non legati.

Aggiungi un colorante per colorare i nuclei cellulari.

Utilizzando la microscopia a fluorescenza, visualizza i marcatori espressi nei neuroni cerebellari, indican