Il modello Monoiodoacetate di osteoartrite Pain in the mouse

L'obiettivo generale di questa procedura è osservare lo sviluppo del dolore da osteoartrite come il comportamento nell'articolazione del ginocchio del topo, iniettando intra-articolarmente Monoiodoacetato e misurando la sensibilità meccanica e i deficit di carico. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nell'area del dolore da osteoartrite, come ad esempio quali meccanismi alla base del dolore nell'osteoartrite e quali bersagli farmacologici sono più promettenti per la terapia futura. Il vantaggio principale di questa tecnica è che è facile da eseguire e consente di regolare la verità della malattia modificando la dose di MIA.

Pertanto, il modello fornisce risposte coerenti simili al dolore durante tutto il periodo di test. Le implicazioni di questa tecnica si estendono alla terapia del dolore da sovrappeso perché il modello MIA risponde alle terapie convenzionali antidolorifiche e può essere utile per la scoperta di farmaci. Per questo protocollo è consuetudine ospitare topi di 8-10 settimane in gruppi di cinque e lasciarli acclimatare alla stanza di stabulazione.

Nell'impostazione dell'esperimento, randomizzare i topi mantenendo lo stesso peso corporeo medio di ciascun gruppo. Etichetta gli animali con dei numeri per accecare lo sperimentatore sui loro trattamenti. Il giorno dell'iniezione, preparare la soluzione di MIA in soluzione fisiologica sterile alle concentrazioni desiderate.

Preparare sempre la soluzione indossando maschera e guanti. La dose massima raccomandata è di un milligrammo per dieci microlitri. Utilizzare soluzione fisiologica sterile per i topi di controllo.

Ora, anestetizzare un topo usando un carrello per anestesia. Utilizzare prima una camera di isoflurano e continuare a erogare lo stesso gas attraverso un cono anteriore durante l'iniezione. Tratta gli occhi con un unguento oftalmico, in modo che non si secchino.

Una volta confermata l'anestesia con un pizzico per le dita dei piedi, posizionare il mouse sulla schiena e tagliare e pulire l'area circostante l'articolazione del ginocchio con alcol. Il tendine rotuleo diventerà visibile come una linea bianca sotto la rotula. Per stabilizzare il sito di iniezione, fissare il ginocchio in posizione piegata.

Metti un dito indice sotto l'articolazione del ginocchio e un pollice sopra la superficie anteriore dell'articolazione della caviglia. Per trovare il sito preciso dell'iniezione, far scorrere un ago da 26 calibri orizzontalmente lungo il ginocchio fino a trovare lo spazio sotto la rotula. Quindi, applicare una leggera pressione per contrassegnare l'area e quindi sollevare l'ago e la siringa verticalmente per l'iniezione.

Guidando l'ago con il pollice, inserire il tendine rotuleo, perpendicolare alla tibia. Non si deve avvertire alcuna resistenza. Effettuare l'iniezione superficiale rispetto al sito di ingresso.

La profondità dell'iniezione è fondamentale per questo modello. È necessario prestare molta attenzione per garantire che l'ago non sia andato troppo in profondità e quindi sia passato attraverso l'articolazione della caviglia. Dopo l'iniezione massaggiare il ginocchio per garantire una distribuzione uniforme della soluzione.

Quindi, rimetti il mouse in una gabbia di recupero pulita su un tappetino riscaldato e lascialo riprendere. Osserva il topo fino a quando non riacquista la decubito sternale. Quindi, rimettilo nella sua gabbia di casa.

Prima di iniziare gli esperimenti comportamentali, indossa sempre un camice, guanti e una maschera. Nei due giorni prima del test, porta i topi nella sala prove e lascia che si abituino a stare in cubicoli acrilici in cima a una griglia di rete metallica in sessioni di due ore. Nei giorni del test, abituare gli animali per un massimo di 60 minuti prima del test.

Quindi, applicare i peli di von Frey calibrati sulla superficie plantare della zampa posteriore. Inizia con un capello da 0,07 grammi. Mantieni i capelli in posizione per tre secondi, o fino a quando la zampa non si ritira.

Dopo dieci secondi applicare i capelli successivi seguendo il metodo su-giù, fino a quando non si trova una forza maggiore nel punto in cui risponde. Non superare un grammo di forza. Una risposta che si verifica a 0,1 grammi o meno è considerata allodinica.

Una volta rilevato un ritiro, ripetere il test dell'animale. Inizia con un filamento una tacca sotto il filamento che ha prodotto il ritiro. Quindi, continua verso il basso attraverso la gamma di forze fino a quando non si osserva alcuna risposta, seguito da una salita attraverso le forze fino a quando la forza di risposta non viene trovata di nuovo.

L'obiettivo è quello di raccogliere una sequenza di 6 risposte per ottenere un k'value. Ripetere il processo sulle zampe omolateralmente e controlateralmente all'arto iniettato. Questa procedura deve essere utilizzata prima dell'iniezione per ottenere una linea di base e per diversi giorni dopo l'iniezione per accertare lo sviluppo di allodinia meccanica.

Questo test utilizza un tester di peso e capacità calibrato con un peso di 100 grammi prima di ogni utilizzo. Come il test di von Frey, esegui questo test prima e dopo le iniezioni. Per iniziare, addestra ogni topo a entrare in una camera di plexiglass sull'apparecchio e a sedersi nella scatola di contenimento.

Per fare ciò, posiziona il mouse davanti alla scatola di contenimento, solleva l'ingresso di 45 gradi e consenti al mouse di entrare liberamente. Quindi, chiudi la scatola. Lascia che gli animali si muovano liberamente fino a quando non adottano una postura seduta.

Ripeti questo allenamento per almeno due giorni fino a quando il topo rimane fermo e non si appoggia su entrambi i lati della camera. Ogni zampa posteriore deve essere posizionata sul pad di registrazione appropriato per la misurazione. La misurazione richiede un secondo per essere raccolta.

Effettua tre misurazioni separate del peso nato su ciascuna zampa posteriore ogni sessione. Utilizzare i valori medi per calcolare la differenza di peso sopportata dalle zampe omolaterali e controlaterali. Gli animali sono considerati ipersensibili se mostrano uno squilibrio di carico del 45% o meno su una zampa.

Un decorso temporale di ipersensibilità meccanica indotta da MIA nelle zampe posteriori omolaterali è stato effettuato utilizzando una gamma di dosi. La dose più bassa di MIA ha indotto una diminuzione del 50% delle soglie il decimo giorno e una diminuzione del 70% entro il giorno 28. La dose più alta ha comportato un calo significativo delle soglie entro il quinto giorno.

Sono state calcolate anche le variazioni del carico. La dose più bassa di MIA non ha avuto alcun effetto misurato sul carico. Ma la dose successiva più grande ha comportato una significativa riduzione del peso sopportato sulla zampa omolaterale dieci giorni dopo l'iniezione.

Dopo aver visto questo video dovresti avere una buona comprensione di come eseguire iniezioni intra-articolari di MIA nel ginocchio del topo e condurre test adeguati per valutare lo sviluppo del comportamento simile al dolore. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in cinque minuti per topo per iniezione se viene eseguita correttamente.

Durante il tentativo di questa procedura è importante ricordare di mantenere gli animali sempre calmi. Non dimenticare che lavorare con il monoiodoacetato può essere estremamente pericoloso e che quando si esegue questa procedura è necessario prendere sempre precauzioni come indossare guanti e maschere. Seguendo questa procedura, è possibile eseguire altri metodi come l'istologia e l'immunochimica, la chimica dell'articolazione del ginocchio, al fine di rispondere a ulteriori domande.

Dopo il suo sviluppo, questa tecnica ha aperto la strada ai ricercatori nel campo del dolore da osteoartrite per esplorare la farmacologia della malattia nei roditori.