Name: Cellule staminali base Immunità Engineered contro linfezione da HIV nel modello umanizzato mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2016-07-02T13:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 38 s
Description: Scopri come creare un modello murino umanizzato BLT con immunità ingegnerizzata contro l'infezione da HIV utilizzando cellule staminali CD34+. Questo metodo consente test preclinici di terapie geniche cellulari.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Vorremmo ringraziare la signora Jessica Selander per averci fornito l'assistente artistica nella realizzazione delle nostre figure. Questo lavoro è stato finanziato da sovvenzioni del NIAID/NIH, sovvenzione n. RO1AI078806, il Centro UCLA per la ricerca sull'AIDS (CFAR), sovvenzione n. P30AI28697, l'Istituto della California per la Medicina Rigenerativa, concede n. TR4-06845, la Federazione Americana per la Ricerca sull'AIDS (amfAR), sovvenzione n. #108929-54-RGRL, e il programma e le iniziative di ricerca multi-campus UC, California Center for Antiviral Drug Discovery (CCADD)

<ol><li>Karpel, M. E., Boutwell, C. L., Allen, T. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((BLT+humanized+mice+as+a+small+animal+model+of+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Current+opinion+in+virology%22%5BJournal%5D)">BLT humanized mice as a small animal model of HIV infection.</a> Current opinion in virology. 13, 75-80 (2015).</li>
<li>Zhen, A., Kitchen, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Stem-cell-based+gene+therapy+for+HIV+infection%5BTitle%5D)+AND+%22Viruses%22%5BJournal%5D)">Stem-cell-based gene therapy for HIV infection.</a> Viruses. 6 (1), 1-12 (2014).</li>
<li>Goulder, P. J. R., Watkins, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+and+SIV+CTL+escape%3A+implications+for+vaccine+design%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">HIV and SIV CTL escape: implications for vaccine design.</a> Nature Reviews: Immunology. 4 (8), 630-640 (2004).</li>
<li>Kitchen, S. G., Bennett, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+Antigen-Specific+T+Cells+from+Genetically+Modified+Human+Hematopoietic+Stem+Cells+in+Immunodeficient+Mice%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Engineering Antigen-Specific T Cells from Genetically Modified Human Hematopoietic Stem Cells in Immunodeficient Mice.</a> PloS one. 4 (12), e8208(2009).</li>
<li>Goulder, P. J. R., Watkins, D. I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV+and+SIV+CTL+escape%3A+implications+for+vaccine+design%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">HIV and SIV CTL escape: implications for vaccine design.</a> Nature Reviews: Immunology. 4 (8), 630-640 (2004).</li>
<li>Kitchen, S. G. S., Levin, B. R. B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vivo+suppression+of+HIV+by+antigen+specific+T+cells+derived+from+engineered+hematopoietic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathogens%22%5BJournal%5D)">In vivo suppression of HIV by antigen specific T cells derived from engineered hematopoietic stem cells.</a> PLoS Pathogens. 8 (4), e1002649(2012).</li>
<li>Yang, O. O., Tran, A. C., Kalams, S. A., Johnson, R. P., Roberts, M. R., Walker, B. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Lysis+of+HIV-1-infected+cells+and+inhibition+of+viral+replication+by+universal+receptor+T+cells%5BTitle%5D)+AND+%22PNAS%22%5BJournal%5D)">Lysis of HIV-1-infected cells and inhibition of viral replication by universal receptor T cells.</a> PNAS. 94 (21), 11478-11483 (1997).</li>
<li>Zhen, A., Kamata, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((HIV-specific+Immunity+Derived+From+Chimeric+Antigen+Receptor-engineered+Stem+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">HIV-specific Immunity Derived From Chimeric Antigen Receptor-engineered Stem Cells.</a> Molecular Therapy. 23 (8), 1358-1367 (2015).</li>
<li>Barrett, D. M., Singh, N., Porter, D. L., Grupp, S. A., June, C. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Chimeric+Antigen+Receptor+Therapy+for+Cancer%5BTitle%5D)+AND+%22Annual+Review+of+Medicine%22%5BJournal%5D)">Chimeric Antigen Receptor Therapy for Cancer.</a> Annual Review of Medicine. 65 (1), 333-347 (2014).</li>
<li>Pejchal, R., Doores, K. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+Potent+and+Broad+Neutralizing+Antibody+Recognizes+and+Penetrates+the+HIV+Glycan+Shield%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">A Potent and Broad Neutralizing Antibody Recognizes and Penetrates the HIV Glycan Shield.</a> Science. 334 (6059), 1097-1103 (2011).</li>
<li>Caskey, M., Klein, F., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Viraemia+suppressed+in+HIV-1-infected+humans+by+broadly+neutralizing+antibody+3BNC117%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Viraemia suppressed in HIV-1-infected humans by broadly neutralizing antibody 3BNC117.</a> Nature. 522 (7557), 487-491 (2015).</li>
<li>West, A. P., Scharf, L., Scheid, J. F., Klein, F., Bjorkman, P. J., Nussenzweig, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Structural+insights+on+the+role+of+antibodies+in+HIV-1+vaccine+and+therapy%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Structural insights on the role of antibodies in HIV-1 vaccine and therapy.</a> Cell. 156 (4), 633-648 (2014).</li>
<li>Lan, P., Tonomura, N., Shimizu, A., Wang, S., Yang, Y. -G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Reconstitution+of+a+functional+human+immune+system+in+immunodeficient+mice+through+combined+human+fetal+thymus%2Fliver+and+CD34%2B+cell+transplantation%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">Reconstitution of a functional human immune system in immunodeficient mice through combined human fetal thymus/liver and CD34+ cell transplantation.</a> Blood. 108 (2), 487-492 (2006).</li>
<li>Melkus, M. W., Estes, J. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+mount+specific+adaptive+and+innate+immune+responses+to+EBV+and+TSST-1%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Humanized mice mount specific adaptive and innate immune responses to EBV and TSST-1.</a> Nature medicine. 12 (11), 1316-1322 (2006).</li>
<li>Shultz, L. D., Brehm, M. A., Garcia-Martinez, J. V., Greiner, D. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Humanized+mice+for+immune+system+investigation%3A+progress%2C+promise+and+challenges%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+Reviews%3A+Immunology%22%5BJournal%5D)">Humanized mice for immune system investigation: progress, promise and challenges.</a> Nature Reviews: Immunology. 12 (11), 786-798 (2012).</li>
<li>Vatakis, D. N., Bristol, G. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Using+the+BLT+humanized+mouse+as+a+stem+cell+based+gene+therapy+tumor+model%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+visualized+experiments+%3A+JoVE%22%5BJournal%5D)">Using the BLT humanized mouse as a stem cell based gene therapy tumor model.</a> Journal of visualized experiments : JoVE. (70), e4181(2012).</li>
<li>De Rosa, S. C., Brenchley, J. M., Roederer, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Beyond+six+colors%3A+a+new+era+in+flow+cytometry%5BTitle%5D)+AND+%22Nature+medicine%22%5BJournal%5D)">Beyond six colors: a new era in flow cytometry.</a> Nature medicine. 9 (1), 112-117 (2003).</li>
<li>Shimizu, S., Hong, P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+highly+efficient+short+hairpin+RNA+potently+down-regulates+CCR5+expression+in+systemic+lymphoid+organs+in+the+hu-BLT+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Blood%22%5BJournal%5D)">A highly efficient short hairpin RNA potently down-regulates CCR5 expression in systemic lymphoid organs in the hu-BLT mouse model.</a> Blood. 115 (8), 1534-1544 (2010).</li>
<li>Denton, P. W., Olesen, R., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Generation+of+HIV+latency+in+humanized+BLT+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+virology%22%5BJournal%5D)">Generation of HIV latency in humanized BLT mice.</a> Journal of virology. 86 (1), 630-634 (2012).</li>
<li>Zhou, J., Zhang, Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Embryoid+bodies+formation+and+differentiation+from+mouse+embryonic+stem+cells+in+collagen%2FMatrigel+scaffolds%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Genetics+and+Genomics%22%5BJournal%5D)">Embryoid bodies formation and differentiation from mouse embryonic stem cells in collagen/Matrigel scaffolds.</a> Journal of Genetics and Genomics. 37 (7), 451-460 (2010).</li>
<li>Vatakis, D. N., Arumugam, B., Kim, S. G., Bristol, G., Yang, O., Zack, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Introduction+of+Exogenous+T-cell+Receptors+Into+Human+Hematopoietic+Progenitors+Results+in+Exclusion+of+Endogenous+T-cell+Receptor+Expression%5BTitle%5D)+AND+%22Molecular+Therapy%22%5BJournal%5D)">Introduction of Exogenous T-cell Receptors Into Human Hematopoietic Progenitors Results in Exclusion of Endogenous T-cell Receptor Expression.</a> Molecular Therapy. 21 (5), 1055-1063 (2013).</li>
<li>Ito, R., Takahashi, T., Katano, I., Ito, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Current+advances+in+humanized+mouse+models%5BTitle%5D)+AND+%22Cellular+%26+Molecular+Immunology%22%5BJournal%5D)">Current advances in humanized mouse models.</a> Cellular & Molecular Immunology. 9 (3), 208-214 (2012).</li>
<li>Martinez-Torres, F., Nochi, T., Wahl, A., Garcia, J. V., Denton, P. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hypogammaglobulinemia+in+BLT+humanized+mice--an+animal+model+of+primary+antibody+deficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PloS+one%22%5BJournal%5D)">Hypogammaglobulinemia in BLT humanized mice--an animal model of primary antibody deficiency.</a> PloS one. 9 (10), e108663(2014).</li>
<li>McCune, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Development+and+applications+of+the+SCID-hu+mouse+model%5BTitle%5D)+AND+%22Seminars+in+Immunology%22%5BJournal%5D)">Development and applications of the SCID-hu mouse model.</a> Seminars in Immunology. 8 (4), 187-196 (1996).</li>
<li>Srivastava, S., Riddell, S. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Engineering+CAR-T+Cells%3A+Design+Concepts%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+immunology%22%5BJournal%5D)">Engineering CAR-T Cells: Design Concepts.</a> Trends in immunology. 36 (8), (2015).</li>
</ol>

Gli autori non hanno nulla da rivelare.

Con l&#39;automobile e HSC-based immunità ingegnerizzato acquistando slancio verso gli studi clinici, è importante avere un modello animale adeguato per esaminare da vicino la differenziazione e la funzione di queste cellule ingegnerizzate. In questo protocollo abbiamo descritto i metodi per costruire e testare i topi umanizzati con cellule staminali geneticamente modificate ingegnerizzate contro l&#39;HIV. E &#39;importante avere efficiente trasduzione di cellule staminali prima del trapianto. Tuttavia, a causa della c...

Nonostante il successo del combinato terapia anti-retrovirale, l&#39;infezione da HIV è ancora una malattia per tutta la vita. La risposta immunitaria cellulare contro l&#39;HIV gioca un ruolo molto importante nel controllo della replicazione di HIV. I recenti progressi nella manipolazione di cellule staminali ha permesso per il rapido sviluppo di approcci di terapia genica per l&#39;HIV trattamento 1-3. Di conseguenza, è importante avere un modello animale adeguato che permette studio in vivo dell&#39;efficacia di terapie cellulari contro l&#39;HIV. Utilizzo di HIV in modelli animali è complicata dal fatto che il virus infetta soltanto cellule umane. Per aggirare questa limitazione, gli scienziati hanno fatto ricorso all&#39;utilizzo di modelli di malattia come il virus dell&#39;immunodeficienza delle scimmie (SIV) in Rhesus macachi 4,5. Purtroppo, ci sono importanti limitazioni in questo modello a causa delle differenze intrinseche tra le specie e le differenze tra SIV e HIV. Inoltre, solo i servizi altamente specializzati sono capable di sostenere il lavoro con i primati non umani e ogni macaco richiede un grande investimento. Pertanto, vi è una necessità urgente di un modello che utilizza il sistema immunitario umano, che è suscettibile di infezione HIV / patogenesi, ed è meno proibitivo finanziariamente. Il diabetici non obesi (NOD) -Grave combinato immunodeficienti (SCID) -Comune gamma catena knockout (c γ - / -) (o NSG) Sangue / Fegato / Thymus (BLT) modello di topo umanizzato è sempre dimostrato di essere uno strumento importante per studiare l&#39;infezione da HIV. Impiantando cellule staminali ematopoietiche (CSE) e del timo fetale, i topi sono in grado di sviluppare e riepilogare un sistema immunitario umano 1-3. Un tipo di terapia genica basata sulle cellule staminali coinvolge &#39;reindirizzamento&#39; cellule T periferiche di indirizzare l&#39;HIV riprogrammando cellule staminali ematopoietiche (CSE) di differenziarsi in cellule T antigene specifico. Abbiamo dimostrato in precedenza che HSC ingegneria con un molecolare clonato anti-HIV specifica re delle cellule Trecettore (TCR) contro l&#39;epitopo SL9 (aminoacido 77-85; SLYNTVATL) del virus HIV-1 gag può reindirizzare le cellule staminali in formazione di linfociti T maturi che sopprimono la replicazione di HIV nel umanizzato NSG-BLT modello di topo 6. L&#39;avvertimento di utilizzare un TCR clonato molecolare è che è limitato ad uno specifico sottotipo antigene leucocitario umano (HLA) che limitare l&#39;applicazione di questa terapia. recettori chimerici antigene (CAR), d&#39;altro canto, possono essere universalmente applicati a tutti i sottotipi HLA. Gli studi iniziali sono stati eseguiti utilizzando un CAR costruito con i domini extracellulari e transmembrana di CD4 umana fusa alla ζ segnalazione intracellulare dominio di CD3 (definito il CD4ζCAR). CD4ζCAR espresso sulle cellule T CD8 può riconoscere busta HIV e scatenare una risposta delle cellule T citotossiche che è simile a quella mediata da un recettore delle cellule T 7. Abbiamo recentemente dimostrato che cellule staminali emopoietiche umane possono essere modificati con CD4ζCAR, che possono poi differenziarsi in molteplici ematopoietiche Lineages, comprese le cellule T funzionali in grado di sopprimere la replicazione dell&#39;HIV nel modello umanizzato del mouse 8. Con il rapido avanzamento in chimerici terapie recettore antigene per il cancro 9, e la caratterizzazione continuo di potenti ampie anticorpi neutralizzanti 10-12 contro l&#39;HIV che permettono la costruzione di un&#39;unica catena CAR anticorpi, è percepibile che molti nuovi costrutti candidati, in aggiunta a CD4ζCAR , sarà generato e testato per la terapia genica a base di cellule staminali di malattie HIV e altre malattie. Inoltre, il modello di topo NSG-BLT umanizzato contenente queste vetture antigene-specifiche può anche fornire un utile strumento per esaminare attentamente le risposte delle cellule T umane in vivo. È importante sottolineare che il nostro protocollo differisce dai metodi descritti precedenti per la costruzione di umanizzato di topi BLT 13-15 dal fatto che la CSE in miscela proteica gelatinosa viene utilizzato al posto di tronchi fegato fetale 16. Questo protocollo descrive: 1) costruzione di Humanitopi BLT zed ingegnerizzati con CD4ζCAR; e 2) caratterizzazione del differenziamento delle cellule geneticamente modificate; e 3) caratterizzazione della funzionalità delle cellule geneticamente modificate.

<table><tbody><tr><td>Kit di microsfere CD34</td><td>Miltenyi</td><td>130-046-702</td><td>Per lo smistamento di cellule progenitrici CD34+ umane</td></tr><tr><td>Bambanker</td><td>Wako</td><td>302-14681</td><td>Per il congelamento di cellule</td></tr><tr><td>Kit di RNA virale QIAamp</td><td>Qiagen</td><td>52904</td><td>Per la misurazione della carica virale nel siero</td></tr><tr><td>MACSQuant Citometro a flusso</td><td>Miltenyi</td><td></td><td>Per l'analisi del flusso</td></tr><tr><td>BD LSRFortessa&trade;</td><td>BD biosciences</td><td>Per l'analisi</td>del <td></td> flusso</tr><tr><td>Ialuronidasi</td><td>Sigma</td><td>H6254-500MG&nbsp;</td><td>Per la digestione dei tessuti</td></tr><tr><td>Desossiribonucleasi I&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Worthington</td><td>LS002006&nbsp;</td><td>per digestione dei tessuti</td></tr><tr><td>Collagenase</td><td>Life tecnologia</td><td>17104-019&nbsp;</td><td>per digestione dei tessuti</td></tr><tr><td>CFX Sistema di rilevamento PCR in tempo reale</td><td>Biorad</td><td></td><td>Per la misurazione della carica virale e dell'espressione genica</td></tr><tr><td>Topi, ceppo NOD. Cg-Prkdcscid Il2rgtm1Wjl/SzJ</td><td>The Jackson Laboratory</td><td>5557</td><td>Per la costruzione dei topi umanizzati</td></tr><tr><td>Penicillina Streptomicina (Pen Strep)</td><td>Thermo Fisher Scientific 10378016</td><td></td><td>Per la coltura di cellule</td></tr><tr><td>Piperacillina/tazobactam</td><td>Pfizer</td><td>Zosyn</td><td>Antimicotico</td></tr><tr><td>Amfotericina B (Fungizone antimicotico)</td><td>Thermo Fisher Scientific</td><td>15290-018</td><td>Antimicotico</td></tr><tr><td>Clip avvolte Autoclip, 9 mm - 1.000 unità</td><td>Becton Dickinson</td><td>427631&nbsp;</td><td>Per chirurgia</td></tr><tr><td>Camici chirurgici sterili Poly-Reinforced Aurora, 30 per cassa&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Medline</td><td>DYNJP2707&nbsp;</td><td>Per chirurgia</td></tr><tr><td>Suture, 4-0, vicryl&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Owens e Minore</td><td>23000J304H&nbsp; &nbsp;</td><td>Per chirurgia</td></tr><tr><td>Tamponi per la preparazione dell'alcol&nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp; &nbsp;</td><td>Owens e Minor</td><td>3583006818</td><td>Per chirurgia</td></tr><tr><td>Guanti chirurgici, 6 1/2</td><td>Owens e Minor 4075711102</td><td></td><td>Per chirurgia</td></tr><tr><td>Yssel' s Medium T-Cell senza siero</td><td>Gemini Bio-prodotti</td><td>400-102</td><td>Per la trasduzione cellulare CD34+</td></tr><tr><td>Albumina sierica umana&nbsp;</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>A9511</td><td>per la trasduzione cellulare CD34+</td></tr></tbody></table>

cellule staminali base immunità engineered contro l&#39;infezione da hiv nel modello umanizzato mouse

Stem-cell Based Engineered Immunity Against HIV Infection in the Humanized Mouse Model

Con il rapido sviluppo di terapie geniche a base di cellule staminali contro l&#39;HIV, non vi è necessità di premere un modello animale per studiare la differenziazione ematopoietiche e la funzione immunitaria delle cellule geneticamente modificate. Il umanizzato midollo osseo / Fegato / Thymus (BLT) topo modello consente la piena ricostituzione di un sistema immunitario umano in periferia, che comprende le cellule T, cellule B, cellule NK e monociti. L&#39;impianto del timo umano consente anche per la selezione timica delle cellule T nel tessuto del timo autologo. Oltre allo studio dell&#39;infezione da HIV, il modello rappresenta un potente strumento per studiare la differenziazione, lo sviluppo e la funzionalità delle cellule derivate da cellule staminali ematopoietiche (CSE). Qui descriviamo la costruzione di umanizzato diabetici non obesi (NOD) -Grave combinato immunodeficienti (SCID) -Comune gamma catena knockout (c γ - / -) topo Hong osseo osseo / Fegato / Thymus (NSG-BLT) con CSE trasdotte con CD4 recettore per l&#39;antigene chimerico (CD4CAR)vettore lentivirus. Abbiamo dimostrato che il CD4CAR CSE può differenziarsi con successo in molteplici linee e hanno attività anti-HIV. L&#39;obiettivo dello studio è quello di dimostrare l&#39;uso del modello di topo NSG-BLT come un modello in vivo per l&#39;immunità ingegnerizzato contro l&#39;HIV. Vale la pena notare che, poiché viene utilizzato lentivirus e tessuti umani, esperimenti e interventi chirurgici devono essere eseguiti in una classe II armadio biosicurezza in un livello di biosicurezza 2 (BSL2) con particolari precauzioni (BSL2 +) struttura.

La figura 1 mostra uno schema di costruzione di topi BLT umanizzati con cellule staminali modificato. 10 settimane dopo la chirurgia implantare, i topi sono stati sacrificati per valutare la differenziazione e sviluppo di cellule geneticamente modificate. Come mostrato in figura 2, molteplici tessuti linfoidi (sangue, milza, timo e midollo osseo) sono state raccolte da un topo che è stato modificato con CD4ζCAR. Il CD4ζCAR utilizzato in questo protocollo...

Questo protocollo descrive i metodi per costruire un modello murino umanizzato di midollo osseo/fegato/timo con immunità ingegnerizzata basata su cellule staminali contro l'infezione da HIV.

Cellule staminali base Immunità Engineered contro l&#39;infezione da HIV nel modello umanizzato mouse

With the rapid development of stem cell-based gene therapies against HIV, there is pressing requirement for an animal model to study the hematopoietic ...

L'obiettivo generale di questa procedura è creare un topo umanizzato modificato con un recettore dell'antigene chimerico. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nei settori dell'HIV e dell'immunologia, in particolare per quanto riguarda la valutazione dell'efficacia dell'immunità ingegnerizzata basata su cellule staminali contro l'infezione da HIV e altre infezioni croniche e malattie tumorali, come i meccanismi di fallimento del sistema immunitario e i modi per potenziare la risposta immunitaria e sviluppare terapie atte a migliorare l'immunità antivirale o antitumorale.Il principale vantaggio di questa tecnica è che consente un ampio numero di manipolazioni sperimentali. Il modello di topi BLT umanizzati riproduce l'immunità umana e, in questo caso, permette test preclinici per terapie geniche cellulari contro l'infezione da HIV. A dimostrare la procedura saranno Valerie Rezek e Brianna Lam, tecnici del mio laboratorio.Iniziare utilizzando bisturi per tagliare il timo in piccoli pezzi di circa un millimetro cubo in una piastra contenente mezzo RPMI integrato. Quindi, utilizzare pinze curve e smussate per posizionare ciascun pezzo di timo in una singola

stem-cell-based-engineered-immunity-against-hiv-infection-humanized

Research

Ricerca

JoVE Journal

Medicine

Medicina

La generazione e la caratterizzazione di cellule T specifiche tumorali usando topi umanizzati è descritto qui. Umana tessuto timico e geneticamente modificate cellule staminali ematopoietiche vengono trapiantate in topi immunocompromessi. Ciò comporta la ricostituzione di un ingegnerizzato sistema immunitario umano consentendo in esame vivo delle risposte immunitarie anti-tumorali.

Uso del mouse BLT umanizzato come cellule staminali basata su un Modello Tumore Terapia Genica

Questo video dimostra una tecnica per generare topi del sistema immunitario umano (HIS). Le cellule staminali ematopoietiche (HSC) CD34+ sono isolate dalle cellule del buffy coat del sangue del cordone ombelicale umano utilizzando perle magnetiche rivestite di anticorpi. Le HSC CD34+ vengono espanse in un terreno di crescita arricchito con citochine e crioconservate. Infine, le HSC scongelate vengono iniettate in un cucciolo di topo immunodeficiente per stabilire il modello murino HIS.

Isolamento delle cellule staminali ematopoietiche del sangue del cordone ombelicale per generare topi del sistema immunitario umano

Questo video dimostra un metodo per generare un modello murino umanizzato duale con un sistema immunitario umano e cellule epatiche. Comporta il trapianto di cellule epatiche umane e cellule staminali e progenitrici ematopoietiche in un topo immunodeficiente transgenico tramite iniezione intrasplenica, portando all'attecchimento delle cellule epatiche e allo sviluppo di cellule immunitarie umane.

Sviluppo di un modello murino umanizzato con cellule epatiche umane e cellule immunitarie

Il video dimostra una tecnica per generare un modello murino umanizzato con immunità ingegnerizzata basata su cellule staminali contro il virus dell'immunodeficienza umana (HIV). Il tessuto del timo fetale umano e le cellule staminali ematopoietiche (HSC) ingegnerizzate vengono impiantate nella capsula renale di un topo gravemente immunocompromesso. Le HSC, che esprimono i recettori chimerici dell'antigene (CAR) contro l'HIV, sono mescolate in una miscela proteica gelatinosa che ne promuove la...

Costruzione di un modello murino umanizzato con immunità ingegnerizzata contro l'HIV

Questo protocollo fornisce un metodo per stabilire topi umanizzati (hu-NSG) tramite iniezione intraepatica di cellule staminali ematopoietiche umane nella radiazione-condizionato topi NSG neonatali. Il mouse di hu-NSG è suscettibile di infezione da HIV e combinatorio antiretrovirale di combinazione (cART) e serve come un modello fisiopatologico adatto per le indagini di replica e la latenza di HIV.

Umanizzato NOD/SCID/IL2rγnull (hu-NSG) Mouse modello per studi di latenza e di replicazione dell'HIV

Questo protocollo fornisce un metodo affidabile per stabilire topi umanizzati sia con il sistema immunitario umano che con le cellule epatiche. I topi immunodeficienti contemporanei ricostituiti ottenuti tramite iniezione intrasplessica di epotociti umani e CD34- cellule staminali ematopoietiche sono suscettibili di infezione da virus immunodeficienza umana-1 e ricapitolano i danni al fegato osservati pazienti affetti da HIV.

Istituzione del modello murino TK-NOG dualizzato per la patogenesi del fegato associata all'HIV

Qui sono descritti tre approcci sperimentali per studiare la dinamica dell'infezione da HIV nei topi umanizzati. Il primo consente lo studio di eventi di infezione cronica, mentre i due ultimi consentono lo studio di eventi acuti dopo l'infezione primaria o la riattivazione virale.

Infezione da HIV cronica, acuta e riattivata in modelli di topo immunodeficienti umanizzati

Abbiamo sviluppato un protocollo per la generazione e la valutazione di un modello murino NOG infettato da virus dell'immunodeficienza umana e umile basato sul trapianto di cellule staminali, sull'esposizione al virus dell'immunodeficienza umana intravaginale e sull'RNA PCR digitale a goccia e droplet Quantificazione.

Mitrai NOG umanizzati per l'esposizione all'HIV intravaginale e il trattamento dell'infezione da HIV

Questo protocollo descrive un nuovo metodo per somministrare farmaci antiretrovirali combinati orali che sopprimono con successo la replicazione dell'RNA dell'HIV-1 nei topi umanizzati.

Trattamento antiretrovirale combinato orale in topi umanizzati infetti da HIV-1

Questo protocollo delinea la generazione di topi del sistema immunitario umano (HIS) per studi immuno-oncologici. Le istruzioni e le considerazioni nell'uso di questo modello per testare immunoterapici umani su tumori umani impiantati in questo modello sono presentate con un'enfasi sulla caratterizzazione della risposta del sistema immunitario umano al tumore.

Test di immunoterapie del cancro in un modello murino umanizzato che porta tumori umani

Scopri come creare un modello murino umanizzato BLT con immunità ingegnerizzata contro l'infezione da HIV utilizzando cellule staminali CD34+. Questo metodo consente test preclinici di terapie geniche cellulari.

Cellule staminali base Immunità Engineered contro l'infezione da HIV nel modello umanizzato mouse

Esplora altri video