Consegna intraduttale al Coniglio ghiandola mammaria

L'obiettivo generale di questa procedura è fornire soluzioni acquose al dotto mammario del coniglio e visualizzare il parto intraduttale mediante ecografia. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della biologia mammaria, ad esempio in che modo le terapie interagiscono in modo diverso con l'ambiente duttale mammario rispetto ad altri siti di somministrazione. Il vantaggio principale di questa tecnica è che il reagente di contrasto per imaging o qualsiasi potenziale terapia da valutare può essere somministrato localmente al tessuto in cui si verificano le lesioni mammarie.

A dimostrare la tecnica sarà Amelia Clark, un tecnico del mio laboratorio. Per iniziare questa procedura, radere accuratamente l'addome caudale di un coniglio anestetizzato nell'area intorno alla terza e quarta coppia di capezzoli inguinali. Con la maggior parte dei peli rimossi, applicare la crema depilatoria sulle zone rasate e 10 minuti dopo l'applicazione, rimuovere la crema con un tovagliolo di carta umido inumidito con acqua tiepida.

Quindi pulire l'area con garze imbevute di alcol per pulire il sito di iniezione. Metti il coniglio sul dorso in un abbeveratoio a forma di V foderato con una coperta di acqua calda a ricircolo in un tampone assorbente. Per preparare il mezzo di contrasto, ricostituirlo secondo le istruzioni del produttore.

Quindi agitare delicatamente la fiala per mescolare. Il mezzo di contrasto utilizzato è stabile a temperatura ambiente per quattro-sei ore dopo la ricostituzione. In questa procedura individuare il terzo e il quarto paio di tettarelle inguinali da iniettare.

Quindi caricare 0,2 millilitri di soluzione fisiologica sterile 0,9 in una siringa di tubercolina luer lock da un millilitro con un ago calibro 22. Smaltire l'ago da 22 gauge una volta che la soluzione salina è nella siringa e sostituirlo con un ago sterile da 25 gauge. Quindi, strofinare delicatamente l'area con alcol isopropilico all'85% su un tampone di guaze.

Con lo smusso dell'ago rivolto verso l'alto e la siringa parallela al corpo dell'animale, inserire l'ago nel lato della tettarella e iniettare lentamente da 0,1 a 0,2 millilitri di soluzione fisiologica per consentire una migliore visualizzazione delle aperture duttali. Successivamente, caricare 0,2 millilitri di soluzione iniettabile in una siringa di tubercolina luer lock da un millilitro. Tenere delicatamente la tettarella con il pollice e l'indice e sollevarla leggermente per l'iniezione intraduttale.

Mantenendo la posizione sollevata della tettarella, incannulare accuratamente il dotto di interesse utilizzando un ago a punta smussata calibro 25. Dopo l'incannulamento, ruotare delicatamente la siringa luer lock sul mozzo dell'ago per infusione con punta smussata fino a bloccarla in posizione. Sollevare la tettarella e iniettare lentamente la soluzione per ridurre al minimo i potenziali danni causati da fluidi in rapido movimento all'interno del condotto.

Ora applica una quantità generosa di gel per ultrasuoni centrifugato sulla pelle dell'area di interesse. Assicurarsi che non ci siano bolle nel gel in quanto comprometterebbero la qualità dell'immagine. Quindi, impostare la profondità di imaging su sei millimetri.

Posizionare il trasduttore da 21 megahertz a contatto con il gel ed eseguire la scansione dell'area di interesse in modalità B. Osservare il mezzo di contrasto nella regione scansionata, compresa l'apertura duttale e in tutto il dotto per confermare la corretta erogazione intraduttale. Quindi cattura e salva l'immagine.

Rimuovere il gel per ultrasuoni dalla pelle dell'animale con una garza. Successivamente, ispezionare il sito di iniezione e assicurarsi che non vi siano segni di trauma nella regione del capezzolo o nel tessuto circostante. Il gonfiore nell'area circostante la tettarella probabilmente indica un'iniezione di cuscinetto adiposo mammario piuttosto che un'iniezione intraduttale riuscita.

Il mezzo di contrasto viene localizzato immediatamente dopo la somministrazione e viene visualizzato 30 minuti dopo la consegna e 45 minuti dopo la consegna. La persistenza del reagente all'interno del dotto mammario consente la visualizzazione per tutta la durata di questo processo. Questa immagine mostra l'aspetto esterno dopo l'iniezione intraduttale di 0,2 millilitri di soluzione di blu di Evans.

All'apertura della pelle, il blu di Evans consente la visualizzazione dell'intero albero duttale mammario e conferma l'intatta struttura duttale. E questa immagine mostra l'intero campione di una regione della ghiandola mammaria inguinale dopo la fissazione e la colorazione con allume carminio. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in circa 15 minuti, escluso il tempo necessario per consentire l'effetto dell'anestesia.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordarsi di sollevare la tettarella per raddrizzare i dotti durante il parto intraduttale. Segui sempre le linee guida sul benessere degli animali del tuo istituto. Seguendo questa procedura, possono essere eseguiti altri metodi come l'imaging avanzato o l'analisi tissutale degli endpoint, come il lizo o l'immunoistochimica, per rispondere a ulteriori domande sulla farmacodinamica o sui cambiamenti morfologici a livello tissutale indotti dalla somministrazione dell'agente terapeutico.

Dopo il suo sviluppo, questa tecnica apre la strada ai ricercatori in biologia mammaria per esplorare la somministrazione di agenti di imaging e terapie nel dotto mammario in futuro. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire la consegna intraduttale alla ghiandola mammaria del coniglio.