生化学

透析は拡散に基づく分子を分離するため生物化学で使用される一般的な手法です。この手順では、半透膜にはサイズに基づいて特定の分子の動きことができます。このメソッドは、タンパク質溶液から脱塩、として知られているバッファーのバッファー分子またはイオンの交換の除去に適用できます。 このビデオをカバーすると共に、一般的なプロシージャ透析のいくつかのアプリケーションがレビューされ、透析の原理遠心、膜タンパク質後洗剤を除去するグラデーションの試薬の除去を含む。抽出、およびソリューション環境の変化によるタンパク質の再構成します。 生化学的サンプルが通常ダウン ストリームの処理や解析を妨げる高いバッファー濃度を持っています。透析は一般的な安価な技術の拡散に基づく分子を分離するために使用します。メソッドは、サイズに基づいて、特定のコンポーネントの移動を可能にする半透膜を利用しています。このビデオは、生化学の透析、一般的な手順とその利用方法のいくつかの概念が表示されます。 ...

酵素反応速度論では、生物に必要な化学反応を促進する生体の酵素の触媒作用について説明します。フォーム製品の基板と呼ばれる分子に作用する酵素。酵素の速度論的パラメーターは直接または間接的に時間をかけて基板または製品の濃度の変化を測定するアッセイによって判別されます。 このビデオでは、酵素反応速度論 (レート方程式を含む) と運動モデルの基本原則をカバーします。酵素試金を支配する概念はまた、典型的な比色定量法に続いて議論します。アプリケーションの説明フェルスター共鳴エネルギー移動 (FRET) 分析、環境では、細胞外酵素を特徴付けるを介して酵素免疫測定法と調査 DNA 修復速度分子プローブの使用します。 酵素は、生命に不可欠な生化学的触媒です。酵素試金は、酵素の触媒作用の解明、酵素反応の動力学的性質の研究に使用されます。このビデオは酵素反応速度論をカバーし、一般的な手順では、上に行くし、.いくつかのアプリケーションを表示

マトリックス支援レーザー脱離イオン化 (MALDI) は、生体分子の解析に最適な質量分析イオン源です。気体状の化合物をイオン化、代わりにサンプルはレーザーによって打たれるマトリックスに埋め込まれます。マトリックスは、エネルギーの大半を吸収します。このエネルギーの一部は、サンプルでは、結果としてイオン化するに転送されます。試料イオンは、飛行時間 (TOF) アナライザーを使用して識別できます。 このビデオは、行列と飛行時間型の質量電荷比を明らかにする使用方法を含む、MALDI-TOF の原則をカバーしています。この手順は、MALDI プレート、プレート、サンプルの読み込みと TOF 質量分析計の操作の準備を示しています。最後のセクションでは、アプリケーションおよびバリエーションが表示されます、全細胞分析を含む複雑な生体試料および電子スプレー イオン化の評価。 マトリックス支援レーザー脱離イオン化または MALDI は、生体分子の解析に最適な質量分析計のイオン源であります。ほとんどのイオン源は、大規模な壊れやすい生体分子から構造情報を削除します。MALDI...

タンデム質量分析法における関心の生体分子は生体試料から分離され、その組成とシーケンスを明らかにするために複数のサブユニットに断片化されました。これは、シリーズの質量分析装置を持っていることで。最初の分光計は、特定質量比を充電するためのサンプルとフィルター イオンをイオン化します。フィルター処理されたイオンは断片化し、フラグメントの分析、2 つ目の質量分析計に渡されます。 このビデオは、質量比の選択と解離のメソッドを含むタンデム質量分析法の原則を紹介します。また生化学的化合物を分析するための一般的な手順で使用しているタンデム質量分析法による衝突誘起解離。アプリケーションでは、監視、タンパク質翻訳後修飾の定量およびタクロリムス血中濃度の検出選択反応を説明します。 タンデム質量分析のリンクが最初に質量分析の複数の段階、生体分子を分離、化学構造の側面を確認して一緒に。生体は、その分子の組成を決定し難い大規模で複雑な構造を持ちます。タンデム質量分析は、後で識別・...

タンパク結晶、生体分子の固体格子を取得はタンパク質の構造を解明し、タンパク質の機能の研究ができます。結晶化は、pH、温度、イオン強度、および蛋白質の集中を含む多くの要因の組み合わせで浄化された蛋白質を乾燥を伴います。結晶を取得すると、蛋白質の構造、x 線回折法と電子密度モデルの計算によって解明されうる。 このビデオは、タンパク質の結晶化を紹介し、一般的な手順を示しています。タンパク質の発現と精製、結晶化、x 線回折の手順で覆われています。タンパク質の結晶化のアプリケーションには、膜タンパク質の構造解析、サイト裁決、インシリコ創が含まれます。 タンパク質の結晶化、蛋白質の格子状固体のフォームを取得するプロセスです。これらの結晶は、構造生物学、タンパク質機能の研究を支援する特に貴重です。量産仕様や SDS ページなどの他の技術だけ蛋白質の一次元構造の情報を提供できます。組換え蛋白質の表現の x 線回折法によるタンパク質の結晶化、補完されます。このビデオは、生化学の分野でタンパク質の結晶化、一般的な研究室プロシージャ、およびそのアプリケーションのいくつかの原則が表示されます。

生化学、クロマトグラフィーによる精製手法を利用して、複雑な混合物から物質を分離します。生化学者で一般的に使用される 2 つの手段は、サイズ排除クロマトグラフィーおよびアフィニ ティー ・ クロマトグラフィー。サイズ排除クロマトグラフィーでは、多孔質ビーズを充填したカラムは、サイズに基づいて混合物のコンポーネントを分離します。一方、アフィニ ティー ・ クロマトグラフィーは生体分子の特定の分離のためターゲット固有の配位子を含む液相で構成される列を使用してできます。 このビデオは、サイズ排除とアフィニ ティー ・ クロマトグラフィー、それらを支配する概念の導入として提供しています。固定化金属アフィニ ティー ・ クロマトグラフィーによるヒスチジン付けられた蛋白質の浄化のためのステップバイ ステップの手順を説明します。生物化学および生物医学研究のクロマト グラフ法の両方のためのアプリケーションがプロファイルもされます。

二次元ゲル電気泳動法 (2DGE) は、生体分子の混合物からの何千もの問題を解決できる手法です。この技法が一緒に結合されている 2 つの明瞭な分離法: 等電集中 (IEF) とナトリウム dodecyl 硫酸ポリアクリルアミドゲル電気泳動 (SDS-PAGE)。これは物理的に彼らの等電点 (電気化学的特性) と、分子量でゲルの 2 つの軸にまたがる化合物を分離します。 このビデオでは手順は、2DGE と複雑なタンパク質溶液の組成を特徴付けるための一般的な手順の主な概念を説明します。病気の発生と進展、治療、次の翻訳後修飾 (PTM) 蛋白質の調査の監視のためのバイオ マーカー検出を含むアプリケーションのセクションでこの技術の 3 つの例のとおりです。 2 次元、または 2 D、ゲル電気泳動法は単一の混合物からたくさんの蛋白質を分離する 2 つの異なる分離法を用いる。1 つの技術の SDS-PAGE やナトリウム dodecyl 硫酸ポリアクリルアミドゲル電気泳動は完全に複雑な混合物だけを切り離すことはできません。第 2 ゲルの電気泳動に 2 番目メソッド、等電点焦点またはライセート...

代謝ラベリングを使用して、生化学的変換とセルに発生する変更をプローブします。自然の生体分子の構造を模倣する化学類縁体を使用して、これは。セルは、類縁体の内因性の生化学的プロセスは、ラベル付けされている化合物を生産を利用します。ラベル検出および親和性の札は、SDS-PAGE や NMR などの他の生化学的分析手法を用いた代謝経路を解明するために使用することができることができます。 このビデオは、代謝ラベリングとショー 2 つの一般的な手順の概念を紹介します。 最初は、同位体標識を使用して蛋白質のリン酸化の特徴します。2 番目のカバー代謝ラベリングのも 3 つのアプリケーション内でのタンパク質間相互作用を特徴付けるための光反応性ラベリング表示されます: 植物素材をラベル付け、分類の速度を測定するための RNA および初期胚の糖鎖をラベリングします。

ゲルシフトアッセイ (EMSA) は、タンパク質や核酸の間のバインディングを明らかにするために使用生化学的なプロシージャです。このアッセイ標識核酸およびテスト蛋白質が混在します。バインディングは、質量に基づくコンポーネントを分離するゲルの電気泳動によって決められてタメて構造。 このビデオは、EMSA とゲルおよび蛋白質の準備、バインド、電気泳動、検出などの一般的な手順の概念を示しています。このビデオで説明したアプリケーションには、クロマチンの酵素、biontinylation が組み込まれた変更された EMSA の分析と結合性細菌の応答調節物質に関する研究が含まれます。 EMSA、電気泳動の移動性シフト試金のゲル シフト試金とも呼ばれますは、汎用性と敏感な生化学的なプロシージャです。EMSA はゲルの電気泳動のバンドの変化に着目したタンパク質と核酸との間のバインディングを解明します。 このビデオは、EMSA の原則を説明、一般的な手順について説明します、いくつかのアプリケーションについて説明します。 DNA 複製、転写と修理、として RNA...

濃度の測定は、多くの生化学的な試金の基本的なステップです。タンパク質の吸光光度定量活用という事実をサンプルに光吸収物質が含まれていますより多く、少ない光は、それを送信します。濃度と吸収との関係は線形なのでこの現象使用できます試料中濃度を測定する不明です。 このビデオでは、タンパク質の吸光光度定量法の基本を解説し、ブラッドフォードの試金および Lowry 方法を紹介します。ビデオの手順は一般的なブラッドフォードの試金をカバーします。覆われているアプリケーションには、核酸濃度・純度を特徴付けるための量が非常に少ない、バイオミメティック材料の効率と Remazol 色素を用いたタンパク質の吸光光度定量の別のバリエーションを結合の決定の直接測定が含まれます。 多くの生化学的な試金の基本的なステップは、サンプル中のタンパク質の濃度を決定します。小さなサンプル サイズの吸光光度定量を行うことができます。サンプルに光吸収物質が含まれていますより多く、それを介して光を送信少ない。これは吸収物質の量的な測定を提供します。これらの概念は、2 つのテクニックを紹介する記事は、すべての時間の 3...

密度勾配遠心分離し、生体分子や細胞構造を浄化するために使用する一般的な手法であります。この手法は、懸濁液、溶媒よりもより密な粒子が堆積物、それらがより少なく密が浮かびますしながら事実を悪用します。高速遠心がこのプロセスを加速する密度勾配遠心管中の密度を減少させるレイヤリング液体によって確立することができます内の生体分子を分離するために使用されます。 ビデオ、サンプル準備、ショ糖密度勾配、超遠心分離と分別された検体のコレクションの作成を示すプロシージャを含む密度勾配超遠心法の原理を説明します。アプリケーションでは、核酸の複合体、およびセシウム塩化密度勾配を用いた分離の分離多蛋白質の複合体の分離を説明します。 密度勾配遠心分離および生化学的な実験のための細胞構造を浄化する一般的な方法であります。手法は、非破壊の密度勾配で細胞成分を分離するのに高速、または、超遠心分離機を使用します。このビデオは、密度勾配超遠心法の原理を説明します、ショ糖密度勾配を使用して一般的な手順について説明します、いくつかのアプリケーションについて説明します。 Ultracentrifuges...

Co-免疫沈降 (CoIP) プルダウン ・ アッセイは、安定したタンパク質間相互作用を識別するために密接に関連するメソッドです。これらのメソッドは、免疫沈降、抗体と結合した自由な蛋白質からターゲット蛋白質を分離する方法に関連しています。CoIP、抗体結合蛋白質は抗体と結合しない別の蛋白質にバインド自体、これはタンパク質タンパク質を保持する分離プロセスによって、続いて複雑な。プルダウンの試金の違いは餌の親和性タグ付きタンパク質を交換して、抗体、アフィニ ティー ・ クロマトグラフィー蛋白質蛋白質の複合体を分離するために使用します。 このビデオでは、CoIP、プルダウンの試金、および研究室での実装について説明します。試薬、装置、浄化し、バインドされた蛋白質を分析するために使用楽器など、各テクニックの手順プロトコルが覆われています。このビデオのアプリケーション セクションが myxovirus 蛋白質がインフルエンザ蛋白、プルダウンの試金および変更されたプルダウン法を介してカルモジュリンにおけるカルシウム...

再構成は、元のフォームまたは関数に分離生体分子を返すプロセスです。これは、膜タンパク質は、細胞の重要な機能を有効にし、近くの脂質の動作に影響を研究するため便利です。原精製膜蛋白質の機能を研究するには、彼らは人工脂質膜にそれらを統合することによって再構成する必要があります。 このビデオは、膜タンパク質の再構成の概念と洗剤、人工の小胞に隔離された蛋白質の定款及びソリューションから洗剤の分離、脂質を用いた人工膜小胞の形成を使用して蛋白質の隔離など、関連する手順を紹介します。最後に、2 つのアプリケーションが覆われている: 膜の輸送蛋白質及び集光性タンパク質の再構成の再構成。 再構成は、元のフォームまたは機能に分離生体分子を復元するプロセスです。このアプローチは、膜タンパク質は、多くの重要な細胞プロセスを有効にして、隣接の脂質の動作に影響を勉強するときによく使用されます。ただし、細胞環境の複雑さは、膜タンパク質機能の勉強は難しいin-situ...

蛍光共鳴エネルギー移動 (FRET) は、近距離の生化学的な相互作用を調査するために使用する現象です。フレットのドナー蓄光分子非放射活性を転送できますエネルギー受容体分子にそれぞれ排出量と吸光度スペクトルが重なっている場合。転送されたエネルギーの量 — とサンプルの全体的な放出したがって — 蓄光分子のドナー-アクセプタ対の近さによって異なります。フレットの解析はこれから生体分子構造と相互作用の詳細な情報を取得するその他の生化学の手法を組み合わせて “ 分光ルーラー。 ” このビデオの原則と FRET 解析の概念をカバー。手順は、フレットとの方法を提示し、データを解釈するためのサンプルの準備について説明します。最後に、セルまたは蛋白質、蛋白質の構造を変える酵素反応の監視の部分のラベル化による構造と細胞のプロセスを監視するアプリケーションが含まれます、セルによって表される単量体の集合を監視するフレットを使用します。 発光分子間エネルギーの非放射伝達であり 蛍光共鳴エネルギー移動、またはフレット、近距離の生化学的な相互作用を調査するために用いられます。フレットは 10...

表面プラズモン共鳴 (SPR) 分子の親和性、反応速度論、特異性、および生体分子の濃度を評価するためのバイオ センサーの無料のラベルの背後にある根本的な光学現象であります。SPR バイオ センサー プリズム上に金属の薄い層で生体分子相互作用が発生します。生体分子のリアルタイムの相互作用は、金属フロンディアの下面からの反射光の変化を測定することによって監視できます このビデオは SPR と解析および生体分子の相互作用を可視化するための使用方法の基本的な概念を説明します。これは、サンプルの準備やスプレーを使用して結合率を調査するための実験プロトコルが続きますアプリケーション] セクションで、SPR イメージング、ローカライズされた SPR、量子ドットの増強 SPR を検討している。 表面プラズモン共鳴または SPR が生体分子の結合・吸着相互作用を評価するための特定のラベル無料バイオの背後にある根本的な現象。ラベル付け、ELISA...