昆虫細胞におけるバキュロウイルス発現系を用いたチクングニアウイルス様粒子の生成

0 閲覧数3:05 • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

チクングニアウイルス様粒子(VLP)は、脂質二重層内に埋め込まれたウイルスエンベロープタンパク質で構成され、遺伝物質を持たない非感染性構造です。

チクングニア熱VLPを産生するには、チクングニア構造遺伝子カセットを発現する組換えバキュロウイルスでSpodoptera frugiperda Sf9昆虫細胞に感染させます。カセットは、カプシドをコードするチクングニア熱構造遺伝子とエンベロープタンパク質と融合したバキュロウイルスプロモーターで構成されています。

インキュベーション中、バキュロウイルスエンベロープ糖タンパク質は昆虫細胞の表面受容体に結合します。これにより、バキュロウイルスの細胞質へのウイルスDNAの侵入と放出が促進され、チクングニアキャプシドとエンベロープタンパク質を含むポリタンパク質が生成されます。

合成後、カプシドタンパク質の自己触媒的切断により、小胞体、ERにエンベロープタンパク質を持つ前駆体ポリタンパク質が生成されます。小胞体内腔では、酵素が前駆体ポリタンパク質を切断し、さらなる処理のためにゴルジコンパートメントに入る個々のタンパク質を生成し、タンパク質ヘテロ三量体を形成します。

ゴルジ体常駐プロテアーゼはタンパク質ヘテロ三量体を切断し、E2およびE1タンパク質を持つ成熟エンベロープタンパク質を産生します。これらのエンベロープタンパク質は膜に移動し、VLPに芽生えて培地に放出されます。

感染した培養物をチューブに移し、遠心分離して昆虫細胞をペレット化します。VLP含有上清を吸引し、ろ過して破片を除去します。

チクングニア熱 VLP を含む得られた濾液は、免疫病理学研究の準備が整います。

多点撹拌プレートシステム上で130 rpmで連続的に攪拌することにより、以前に調製したSpodoptera frugiperda、またはSf9細胞をスピナーフラスコに懸濁して培養します。適切な曝気のために、培養量をスピナーフラスコの容量の半分以下に維持してください。次に、スピナーフラスコ中の250ミリリットルのSf9細胞を1ミリリットルあたり2 x 106細胞の密度で、事前に調製した組換えバキュロウイルスで感染させることにより、CHIK VLPを発現し、細胞を摂氏28度のインキュベーターに戻します。

トリパンブルー除外を使用して、細胞生存率が70%から80%に低下したかどうかを判断します。確認したら、培養物を懸濁液から50ミリリットルの円錐形チューブに直接移し、細胞をスピンダウンします。上清を収集し、沈降前に0.22ミクロンの細孔膜でろ過します。

10:18

Dibromomaleimide 二硫化化学蛍光ペグインターフェロン ウイルス様粒子を抱合誘導を作る

関連動画

0 再生回数

07:02

フローサイトメトリーを用いた経月細菌に結合するヒトノロウイルスウイルス様粒子の定量化

関連動画

0 再生回数

05:15

捕捉アッセイを用いたウイルス様粒子(VLP)ベースワクチンに対する抗原中中和感受性エピトープの検出

関連動画

0 再生回数

09:41

昆虫細胞における組換えmCD1dタンパク質の製造方法。

関連動画

0 再生回数

03:09

哺乳類系を介したインフルエンザウイルス様粒子の生成技術

関連動画

0 再生回数

12:18

バキュロウイルス発現系を用いた新規H7N9インフルエンザウイルス由来の機能組換えヘマグルチニンとノイラミニダーゼタンパク質の発現

関連動画

0 再生回数

13:52

生物物理学研究のための昆虫細胞からの効率的な生産と組換えマウスKindlin-3の精製

関連動画

0 再生回数

06:17

ワクチン接種のための発現およびウイルス様粒子の精製

関連動画

0 再生回数

12:09

培養昆虫細胞における一過性発現および組換えタンパク質の細胞内局在

関連動画

0 再生回数

11:12

昆虫細胞 (sf9) 蛋白質機能の試金のための外国遺伝子の一過性発現

関連動画

0 再生回数

最終更新:15 8月 2026