多電極アレイを用いたニワトリ胚神経ネットワーク発生に対する毒素の影響の評価

細胞外マトリックスでコーティングされた多電極アレイ(MEA)上の初期胚性ニワトリニューロンの接着培養から始めます。

MEAのベースには、ニューロンの活動を記録する小さな電極のグリッドが含まれています。

試験培養では、ニューロンは毒素の存在下で増殖しますが、対照培養では、ニューロンは毒素なしで増殖します。

記録する前に、両方のMEAの培地を毒素のない培地に交換し、短時間インキュベートします。

次に、1つのMEAを記録装置に入れて記録を開始します。

ニューロンは、活動電位またはスパイクと呼ばれる電気インパルスを介して通信します。

シナプスでは、これらの活動電位が神経伝達物質の放出を引き起こし、信号を次のニューロンに伝播させます。

MEA電極は、シナプスに接続されたニューロンによって生成されたスパイクを記録します。

対照条件では、健康な成熟ニューロンネットワークは同期スパイク活動を示します。

試験培養では、スパイクと同期の減少は、毒素によって引き起こされるニューロンネットワークの成熟障害を示唆しています。

取得当日に、培地を新鮮な神経基底培地と交換し、記録する前にアレイをCO₂インキュベーターに最低2時間戻します。記録ソフトウェアを起動し、温度アイコンをクリックして多電極アレイの温度を摂氏37度に設定します。左側のウィンドウパネルでストリームを選択し、ミューズアイコンを右クリックして、取得パラメータを設定します。次に、[処理とスパイク検出器の追加]を選択し、ポップアップウィンドウで[OK]をクリックします。Spike Detector 6 by STDは、ファイル名の下に表示されます。

次に、スパイク検出器を右クリックし、処理とバースト検出器の追加を選択し、ポップアップウィンドウでOKをクリックします。バースト検出器ISIは、ミューズアイコンの下に表示されます。次に、Burst Detector を右クリックし、Add Processing and Neural Statistics Compiler を選択します。ポップアップウィンドウで、[ファイルヘッダー]、[集計ウェル 統計情報]、および[同期]が選択されていることを確認します。[OK] をクリックします。

コンパイラが下に表示されます。画面下部の時計アイコンをクリックし、[設定]セクションの情報を5.1分ごとに記録し、5分間記録するように変更します。これはすぐに開始され、一度実行されます。インキュベーターから多電極アレイを取り出した後、記録ユニットに置き、所定の位置にロックします。スケジュールされた録画セクションの [録画の開始] をクリックして、ネットワーク アクティビティの録画を開始します。