Name: ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定 (動画) | JoVE Journal
Uploaded: 2018-08-20T12:30:00.000+00:00
Duration: 9 min 42 s
Description: 学ぶワイヤー図法によるマウス腸間膜動脈の等尺性収縮力測定。血管平滑筋の収縮機構と高血圧治療薬のスクリーニングに有用な手法です。

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

テクニカル サポート、博士魏斉彼 (東呉大学、中国・蘇州) と博士ヤン寧喬 (陝西師範大学、西安、中国) に感謝します。この作品は中国の国家自然科学基金 (グラント 31272311、81373295、81473420)、優先度学術プログラム開発の江蘇高等教育機関 (グラント号のプロジェクト資金によって支えられました。ysxk-2016)。

動物操作機関動物ケアおよび使用委員会 (IACUC) モデル動物研究センターの南京大学によって承認されました。
1. ソリューションの準備
<ol><li>HEPES Tyrode ソリューション (H-T) 137.0 mM NaCl、KCl 2.7 mM、1.8 mM CaCl2、1 mM MgCl2∙6H2O、5.6 mM D-グルコースおよび 10 mM HEPES、使用準備 pH 7.3 7.4。</li>
	<li>カルシウムなし HEPES Tyrode ソリューションを準備 (Ca2 +-無料の H T) 140.6 mM NaCl、2.7 mM KCl、1 mM MgCl2∙6H2O、5.6 mM D-グルコース 10 mM HEPES、pH 7.3 7.4 を使用します。</li>
	<li>124 mM KCl (高 K+) 15.7 mM の NaCl、KCl、124.0 mM 1.8 mM CaCl2, 1 mM MgCl2∙6H2O, 5.6 mM D-グルコースと 10 mM HEPES、pH を使用してを使用して HEPES Tyrode ソリューション準備 7.3 7.4。</li>
</ol>2. 実験準備
<ol><li>予熱時間 T と 37 ° C の水浴を使用した高 K+ソリューション。</li>
	<li>第 1 報システム、データ集録ハードウェアとコンピューターを入れます。</li>
	<li>慎重に各 H T 溶液 5 mL ですべて第 1 報室を埋めます。</li>
	<li>20 ml の 4 ° C H T と Ca2 +の 2 つのペトリ皿を埋める-H T ソリューションをそれぞれ、無料、氷の上を格納します。</li>
	<li>H T 溶液 20 mL でコーティング 10 cm シャーレを入力し、部屋の温度でそれを維持します。</li>
</ol>3. マウスの腸間膜動脈解離
<ol><li>頚部転位によって 8-12 週齢の c57bl/6 j 女性または男性マウスを安楽死させます。上向きの腹部とマウスを突き止めます。</li>
	<li>70% エタノールで腹部を湿らせます。鼠径部から腹側正中線に沿ってはさみで皮膚を切って、両側の脚に下方の最初の切開開始から切開を加えます。両面に皮膚を引っ張ってください。腹膜を開く同じような切開を行います。</li>
	<li>食道、大腸、体内から血管を餌と消化管を完全に隔離する他の結合組織を切るはさみを使用しています。</li>
	<li>鉗子、血液を洗浄する冷 H T ステップ 2.4 に用意され、数回 H T ソリューションで組織を優しくすすぎを含む皿に分離セグメントを移動します。</li>
	<li>2.5、準備したコーティングのシャーレにセグメントを分離を転送し、室温で上腸間膜動脈解離を行います。</li>
	<li>胃、腸、回腸、盲腸、時計回りの方向を滑らかにし、胃と盲腸の左側と右側の側では、それぞれピンします。</li>
	<li>腸間膜血管ベッドをストレッチし、公開解剖した腸間膜動脈にピンと腸を修正します。 注: これらの条件の下で、動脈は静脈の上にです。</li>
	<li>実体顕微鏡の伝送光源をオンにし、顕微鏡下で動脈を切り裂きます。全体の組織がソリューションに没頭していることを確認します。</li>
	<li>動脈周囲の脂肪組織を鉗子でクランプし、解剖はさみですべての結合組織を遮断し、動脈を分離します。避けるために、動脈を負傷します。</li>
</ol>4. 動脈取付
<ol><li>転送し、冷たい Ca2 +に上腸間膜動脈樹を浸す-余分な動脈を鉗子でクランプによって H T ソリューション (2.4 の手順で準備) を無料します。</li>
	<li>腸間膜のアーケードの腸の壁に近位動脈の 1.4 mm 部分を切断し、この動脈セグメントの両方の側面を慎重に開く 2 つの鉗子を使用します。</li>
	<li>ステンレス鋼ワイヤの長さ 2.5 cm の 2 つのセグメントを準備し、同じ皿にそれらを置きます。</li>
	<li>優しく、鉗子を用いた動脈の片方の端をクランプし、慎重に別の鉗子の助けを借りて 1 つずつ動脈の内腔に 2 本のワイヤを挿入します。ワイヤーがまっすぐに保持されますおよび血管内皮細胞には触れないでを確認します。</li>
	<li>2 つの鉗子を使用すると、スレッドの容器の外 2 つのスチール ワイヤを同時にクランプし、慎重に H T ソリューション (ステップ 2.3) で以前満ちていた第 1 報区域にシャーレから船を転送します。</li>
	<li>顎を離れてのネジ取り付け用のスペースを作る。2 つの鉗子を使用して 2 つの挿入された線のいずれかの両方の側面をクランプし、顎の隙間 (図 1 a) に容器を置きます。</li>
	<li>マイクロメータ (図 1 b) に接続されている顎のネジに固定線の両側を折り返します。</li>
	<li>左側のネジを時計回りにねじることによって修正します。右手の鉗子を使用してワイヤーをまっすぐにし、右側のネジを時計回りに (図 1) をねじることによって修正します。船は常に顎ギャップ内のことを確認してくださいが、損傷を避けるために顎を触れないでください。</li>
	<li>マイクロメータ (図 1) を使用して 2 つの顎を閉じる。2 つの顎が十分に近い彼らに触れないでお互い、固定線の上部に固定されていない線であるが、ことを確認します。</li>
	<li>右手の鉗子を使用して、慎重に探触子を強制的に接続されている顎の角でフロントレンズアセンブリのワイヤーを折り、右側にネジ (図 1E) 周りを時計回りに包んでください。ネジを固定します。線の左側にこの手順を繰り返し、左側にあるネジ (図 1 f) を修正します。</li>
	<li>慎重にマイクロメータ (図 1) を回転させることにより少し離れての顎を移動します。船のストレッチを避けます。鉗子を使用すると、探触子側でワイヤーの水平方向の平面にマイクロメータ側でワイヤーを移動します。2 つの顎の間のギャップはちょうど 2 つのワイヤを適応できるように、慎重にマイクロメータを回転します。</li>
	<li>他のチャンバーに動脈をマウントする手順 4.2-4.11.すべての部屋を装置に接続、チャンバー カバー、100% 酸素供給・温度プローブを接続、37 ° C に加熱を開始グラフ作成ソフトウェアを開き、録音を開始する、グラフ ビューウィンドウの開始ボタンを押します。</li>
	<li>約 20 分を平衡します。</li>
</ol>5. 正規化
注: 実験条件を標準化するために、血管の生理学的応答性信頼性の高いを取得する、正規化手順は必要な15です。アクティブな力と容器の内部の円周の関係, によると線第 1 報システムはマウントされた容器5,8の内部の円周 (IC) を評価するために標準の正規化プログラム 9。簡潔に、マイクロメータの IC (μ m) の計算、読み取って、トランスデューサーと X の値として値を入力するには、Y の値として力、すなわち、壁張力 (mN/mm)、休憩を出力します。プログラムは (X, Y) の曲線を戻り、100 mmHg (IC100) の経壁圧に対応する IC を計算します。船が正規化された内部の円周 (IC の1) に設定されているアクティブな応答性が最大。
<ol><li>デバイス上の力をすべてのチャネル 0 に設定し、別の 1-2 分の平衡します。</li>
	<li>正規化の設定から選択、「DMT メニュー、および次ようパラメーターを設定。 接眼レンズ校正 (mm/div): 0.36;圧 (kPa) をターゲット: 13.3;IC1/IC100: 0.9。オンライン平均時間 (秒): 2;遅延時間 (秒): 60。DMT 正規化の設定ウィンドウを閉じるに[ok]ボタンをクリックします。</li>
	<li>対応するチャネルの DMT の正規化] ウィンドウを開くには、 DMT メニューから目的のチャンネルを選択します。ウィンドウに定数値を入力すると、次のように: 組織エンドポイント a1: 0.1;組織エンドポイント a2: 4;線径 (μ m): 40。ウィンドウには、1.40 mm として計算される容器の長さが表示されます。</li>
	<li>適切な組織の部屋のマイクロメータをお読みください。マイクロメータの読みのボックスに値を入力し、ポイントの追加] ボタンをクリックします。この値 (X0) X の初期値です。60 秒遅延時間後力とこのメーターの値に対応する効果的な圧力 (ERTP) がウィンドウに表示されます。同時に、マイクロメータを読むボックスがアクティブになります。</li>
	<li>反時計回りの方向でマイクロメータを回すことによって正規化されている容器をストレッチします。マイクロメータを読むボックスにマイクロメータ値を入力し、ポイントの追加] ボタンをクリックします。60 の遅延時間を待ち再度 s。</li>
	<li>ステップ 5.5 を繰り返し、続行船をストレッチし、「マイクロメータ X1」、その IC1容器を伸ばすために必要な計算されたマイクロ メーター設定である値が表示されるまで、マイクロメータの値を追加します。</li>
	<li>1の値を X にマイクロ メーターを設定します。 注: 正規化された張力は通常 1-2 mN です。</li>
</ol>6. 動脈収縮記録
注: H T とこのセクションで使用される高 K+ソリューションを含む、すべてのソリューションは、手順 2.1 で調製しました。
<ol><li>正規化の後、15 〜 20 分のために部屋に容器を平衡します。 注: これらはこの手順では、ソリューションを変更する必要はありません。</li>
	<li>高 K+ソリューションの容器に 2 回挑戦します。<ol>
<li>船に挑戦、3-4 回 H T 溶液 5 mL で洗浄後、10 分のための収縮を誘発する高 K+溶液 5 mL と H T ソリューションを交換してください。 注: 一般的な収縮は、最大の力 3 mN および 2.5 mN12の周り一定の持続力。初挑戦 2.5 mN 以下の最大の力を生成するとともに、持続的な力を減少または 2 番目の課題は初めての用量よりもはるかに低い力を生成します、船は破棄され、さらに調査のため使用されません。</li>
	</ol>
</li>
	<li>収縮を誘発し高 K+溶液 5 mL の容器に挑戦します。5 分後に 1 μ M の neoliensinine の最終濃度で血管をリラックス室に neoliensinine 原液 (DMSO 10 mM)14 0.5 μ L を追加します。</li>
	<li>力が安定している場合 (これは通常、いくつかの分を) 濃度を増加する 2 μ m 追加 1 μ L に原液のたびに t を生成する 4、6、8、10 μ M の濃度を増加する商工会議所に別 0.5 μ neoliensinine 原液を追加彼の用量反応曲線。 注: 在庫と作業濃度は薬によって異なります。</li>
</ol>

<ol><li>Bevan, J. A., Osher, J. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+direct+method+for+recording+tension+changes+in+the+wall+of+small+blood+vessels+in+vitro%5BTitle%5D)+AND+%22Agents+and+Actions%22%5BJournal%5D)">A direct method for recording tension changes in the wall of small blood vessels in vitro.</a> Agents and Actions. 2 (5), 257-260 (1972).</li>
<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+vascular+smooth+muscle+cells+in+situ%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of vascular smooth muscle cells in situ.</a> Nature. 260 (5552), 617-619 (1976).</li>
<li>Mulvany, M. J., Halpern, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Contractile+Properties+of+Small+Arterial+Resistance+Vessels+in+Spontaneously+Hypertensive+and+Normotensive+Rats%5BTitle%5D)+AND+%22Circulation+Research%22%5BJournal%5D)">Contractile Properties of Small Arterial Resistance Vessels in Spontaneously Hypertensive and Normotensive Rats.</a> Circulation Research. 41 (1), 19-26 (1977).</li>
<li>Mulvany, M. J., Nyborg, N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((An+increased+calcium+sensitivity+of+mesenteric+resistance+vessels+in+young+and+adult+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22British+Journal+of+Pharmacology%22%5BJournal%5D)">An increased calcium sensitivity of mesenteric resistance vessels in young and adult spontaneously hypertensive rats.</a> British Journal of Pharmacology. 71 (2), 585-596 (1980).</li>
<li>Mulvany, M. J. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aMulvany%2C+MJ+%22Procedures+for+investigation+of+small+vessels+using+small+vessel+myograph%22">Procedures for investigation of small vessels using small vessel myograph</a>. , Danish Myo Technology. Denmark. (2004).</li>
<li>Halpern, W., Mulvany, M. J., Warshaw, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanical+properties+of+smooth+muscle+cells+in+the+walls+of+arterial+resistance+vessels%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Physiology%22%5BJournal%5D)">Mechanical properties of smooth muscle cells in the walls of arterial resistance vessels.</a> The Journal of Physiology. 275, 88-101 (1978).</li>
<li>Michael, S. K., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((High+blood+pressure+arising+from+a+defect+in+vascular+function%5BTitle%5D)+AND+%22Proceedings+of+the+National+Academy+of+Sciences+of+the+United+States+of+America%22%5BJournal%5D)">High blood pressure arising from a defect in vascular function.</a> Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 105 (18), 6702-6707 (2008).</li>
<li>Bridges, L. E., Williams, C. L., Pointer, M. A., Awumey, E. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mesenteric+artery+contraction+and+relaxation+studies+using+automated+wire+myography%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+of+Visualized+Experiments%22%5BJournal%5D)">Mesenteric artery contraction and relaxation studies using automated wire myography.</a> Journal of Visualized Experiments. (55), (2011).</li>
<li>del Campo, L., Ferrer, M. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3adel+Campo%2C+L+%22Wire+Myography+to+Study+Vascular+Tone+and+Vascular+Structure+of+Isolated+Mouse+Arteries%22">Wire Myography to Study Vascular Tone and Vascular Structure of Isolated Mouse Arteries</a>. , Springer. New York. (2015).</li>
<li>Fisher, S. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vascular+smooth+muscle+phenotypic+diversity+and+function%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Genomics%22%5BJournal%5D)">Vascular smooth muscle phenotypic diversity and function.</a> Physiological Genomics. 42 (3), 169-187 (2010).</li>
<li>Crowley, S. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Distinct+roles+for+the+kidney+and+systemic+tissues+in+blood+pressure+regulation+by+the+renin-angiotensin+system%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Clinical+Investigation%22%5BJournal%5D)">Distinct roles for the kidney and systemic tissues in blood pressure regulation by the renin-angiotensin system.</a> The Journal of Clinical Investigation. 115 (4), 1092-1099 (2005).</li>
<li>Qiao, Y. N., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Myosin+phosphatase+target+subunit+1+%28MYPT1%29+regulates+the+contraction+and+relaxation+of+vascular+smooth+muscle+and+maintains+blood+pressure%5BTitle%5D)+AND+%22The+Journal+of+Biological+Chemistry%22%5BJournal%5D)">Myosin phosphatase target subunit 1 (MYPT1) regulates the contraction and relaxation of vascular smooth muscle and maintains blood pressure.</a> The Journal of Biological Chemistry. 289 (32), 22512-22523 (2014).</li>
<li>He, W. Q., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+myosin+light+chain+kinase+in+regulation+of+basal+blood+pressure+and+maintenance+of+salt-induced+hypertension%5BTitle%5D)+AND+%22American+Journal+of+Physiology-Heart+and+Circulatory+Physiology%22%5BJournal%5D)">Role of myosin light chain kinase in regulation of basal blood pressure and maintenance of salt-induced hypertension.</a> American Journal of Physiology-Heart and Circulatory Physiology. 301 (2), H584-H591 (2011).</li>
<li>Yang, G. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+and+identification+of+a+tribenzylisoquinoline+alkaloid+from+Nelumbo+nucifera+Gaertn%2C+a+novel+potential+smooth+muscle+relaxant%5BTitle%5D)+AND+%22Fitoterapia%22%5BJournal%5D)">Isolation and identification of a tribenzylisoquinoline alkaloid from Nelumbo nucifera Gaertn, a novel potential smooth muscle relaxant.</a> Fitoterapia. 124, 58-65 (2018).</li>
<li>Slezák, P., Waczulíková, I., Bališ, P., Púzserová, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Accurate+Normalization+Factor+for+Wire+Myography+of+Rat+Femoral+Artery%5BTitle%5D)+AND+%22Physiological+Research%22%5BJournal%5D)">Accurate Normalization Factor for Wire Myography of Rat Femoral Artery.</a> Physiological Research. 59 (6), 1033-1036 (2010).</li>
<li>Kearney, P. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+burden+of+hypertension%3A+analysis+of+worldwide+data%5BTitle%5D)+AND+%22The+Lancet%22%5BJournal%5D)">Global burden of hypertension: analysis of worldwide data.</a> The Lancet. 365 (9455), 217-223 (2005).</li>
<li>Good, N. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+Ion+Buffers+for+Biological+Research%5BTitle%5D)+AND+%22Biochemistry%22%5BJournal%5D)">Hydrogen Ion Buffers for Biological Research.</a> Biochemistry. 5 (2), 467-477 (1966).</li>
</ol>

著者が明らかに何もありません。

高血圧は、心血管などの重篤な合併症など腎臓疾患16広範な公衆衛生課題です。高血圧の病因を理解とより抗高血圧薬の探索は、この分野で緊急の課題になっています。血圧が生成され、循環の末梢血管抵抗によって維持されます。ポアズイユの法則によると比較的小さい動脈循環抵抗の大きい割合を生成し、血圧3,10の主要生産者として役立ちます。したがって、太い動脈ではなく、小さな抵抗血管の測定は血圧の研究に適しています。ワイヤー第 1 報技術は、小さな抵抗血管の生理機能や血管疾患の病因を研究する最高の様相の 1 つです。
小型船舶ワイヤー第 1 報システムは、他のレポートにも記載されているし、大動脈9などのラットの腸間膜動脈8とマウスの動脈の収縮を測定するために使用されました。遺伝子操作、様々 な疾患モデルや薬物のスクリーニング モデル、マウスを利...

ここで使用される小型船舶の第 1 報システムだった測定の内部直径 100 から 400 μ m 分離小型船舶 (約 2 mm 長い) に至るまでの小さな抵抗血管の等尺性収縮直径 40 μ m 2 本のワイヤーによって挿入されたし、順番にマイクロメータ側と探触子側の顎にマウントされています。この第 1 報手法だった 1972年1で最初に提案したし、Mulvany と彼の同僚2,3,の4,5,6が主に開発しました。今、安定装置、簡単なパフォーマンス標準正規化手順7,8,9と成熟した技術です。我々 はマウスの腸間膜動脈で測定にいくつかの変更でこのメソッドが利用されています。
血管平滑筋は、ほとんどすべての血管の壁を行します。その基本的な機能は、様々 な刺激に対する応答の収縮力を生成します。通常血管平滑筋収縮は血圧調節に欠かせない、栄養補完10。様々 な病気、高血圧、心不全、虚血.などの血圧測定結果の異常な規制いくつかの研究では、異常な血圧が血管平滑筋機能不全収縮7,11,12,13に関連付けられて常にことを示唆しています。第 1 報の方法では、血管収縮薬、阻害薬など様々 な刺激によるマウス血管の等尺性収縮の調査をことができます。収縮の成功の測定は、血圧維持と血管平滑筋疾患の新規治療アプローチを模索する病態のメカニズムを理解するのに役立ちます。
多くの中国のハーブは、血管疾患の臨床治療のため広く使用されています。ただし、その有効成分は通常不明のままに。したがって、有効成分の分離・同定は、新規治療薬の開発のため非常に重要です。第 1 報マルチ ワイヤ技術では、ハーブの有効成分をスクリーニングするための単純なアプローチを提供しています。小型船舶の第 1 報システムを使用してマウスの腸間膜動脈の収縮を調査するいくつかの研究を報告し、抗高血圧活動12,13,14天然化合物を識別しました。ここでは、詳細な説明第 1 報の方法のためのプロトコルし、ロータス (ハス春まき) 種子の胚から分離した neoliensinine の弛緩効果を評価14。

<table><tbody><tr><td>マルチワイヤー筋電計システム</td><td>DMT</td><td>610-M</td><td></td></tr><tr><td>ステンレス鋼線</td><td>DMT</td><td>400447</td><td></td></tr><tr><td>Geuder 解剖ハサミ</td><td>DMT</td><td>400431</td><td></td></tr><tr><td>デュモン鉗子</td><td>DMT</td><td>300413</td><td></td></tr><tr><td>PowerLab/8SP</td><td>ADInstruments</td><td>ML785</td><td></td></tr><tr><td>ソフトウェア</td><td>ADInstruments</td><td>LabChart 5</td><td></td></tr><tr><td>NaCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>S5886</td><td></td></tr><tr><td>KCl</td><td>SigmaAldrich</td><td>P5405</td><td></td></tr><tr><td>CaCl2</td><td>SigmaAldrich</td><td>C4901</td><td></td></tr><tr><td>MgCl2&middot;6H2O</td><td>SigmaAldrich</td><td>M2393</td><td></td></tr><tr><td>D-Glucose</td><td>SigmaAldrich</td><td>G6152</td><td></td></tr><tr><td>HEPES</td><td>Sangon Biotech</td><td>A100511-0250</td><td></td></tr><tr><td>NaOH</td><td>SigmaAldrich</td><td>S8045</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>SigmaAldrich</td><td>D2650</td><td></td></tr></tbody></table>

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

Isometric Contractility Measurement of the Mouse Mesenteric Artery Using Wire Myography

ワイヤー第 1 報技術を使用して脱分極の応答、GPCR アゴニスト/阻害薬.での血管平滑筋の収縮性を評価するには血管平滑筋の生理学的機能、高血圧など血管系の疾患の病態解明と平滑筋弛緩薬の開発に関する多くの研究で広く使用されます。マウス疾患モデル、遺伝子組み換え系統の大きなプールで広く使用されているモデル動物であります。詳細にマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮を測定する方法を紹介します。マウス腸間膜動脈の 1.4 mm のセグメントは分離され、内腔を通して 2 つの鋼線を渡すことによって第 1 報室にマウントされています。平衡と正規化の手順の後、血管収縮アッセイの前に 2 回高 K+ソリューションによってし。医薬品開発におけるこのメソッドのアプリケーションの例としてマウスの腸間膜の新規天然物質の neoliensinine、中国のハーブ、ハスの実 (ハス春まき。) の胚から分離した弛緩効果を測定動脈。第 1 報室に取り付けられた容器セグメント高 K+溶液で刺激を受けました。力の張力が安定した持続的な段階に達したら、neoliensinine の累積線量は商工会議所に追加されました。それは高血圧に対する潜在的な活性をクマが示唆その neoliensinine 平滑筋収縮に対する用量依存性弛緩効果があったとわかりました。さらに、血管できます取り付け後、少なくとも 4 時間を生き残るため、何回も、我々 はお勧めの高 K+ソリューションによる収縮性が維持された、創薬スクリーニングの時間のかかるプロセスの線第 1 報システムを使用すること。

第 1 報配線システムを使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮を測定し、, ロータス (ハス春まき) 種子の胚から精製した neoliensinine の弛緩効果を評価14. マウスの腸間膜動脈の分離、結合組織の洗浄、1.4 mm のセグメントにカットします。Ca2 +鋼のワイヤー 2 本で挿入された動脈セグメント-シャーレ、H T ソリューションを無料し、し、セグメントの第 1 報室 (図 2 a) の 2 つの顎にマウントされていた。セグメントをマウントした後 2 本のワイヤは、平行する、すぐお互い (図 2 b) に触れていないが、調整されました。力測定前に血管は正規化され船を安定させるために高 K+ソリューションによる 2 回。正規化中に、船は、IC、100の値に到達するまで数回を伸ばされ、各ストレッチ サイクルは、...

線第 1 報技術を使用して、血管平滑筋機能や画面の新しい薬を調査します。今回はマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮を測定して血管平滑筋の弛緩を新しいスクリーニングのための詳しいプロトコル。

The wire myograph technique is used to assess the contractility of vascular smooth muscles in response to depolarization, GPCR agonists/inhibitors and ...

当研究室では、長年にわたりワイヤーミオグラフ法を用いて血管平滑筋の収縮性を測定してきました。この手法を用いて、平滑筋の収縮のメカニズムを研究しています。この手法を用いて、高血圧治療のための新薬を探索しています。この技術の主な利点は、血管セグメントが取り付け後少なくとも4時間生存し、高カリウムによって誘発される収縮性を何度も維持することです。マルチチャンネルシステムは、新薬の高度な治療スクリーニングの機会を提供します。安楽死させたマウスの体を腹部を上に向けて固定し、腹部を70%エタノールで湿らせます。次に、ハサミを使用して鼠径部から腹側正中線に沿って皮膚を切った後、最初の切開の開始点から各脚に切開を行います。皮膚を両側で引き戻し、同様の切開を行って腹膜を開きます。次に、はさみを使用して食道、結腸、その他の結合組織を切断し、栄養血管系で胃腸管を体から完全に分離します。消化管から血液をHEPES-TyrodeまたはH-T溶液で洗い流した後、分離されたセグメントをコーティングされたペトリ皿に移し、室温で腸間膜動脈解剖を行います。胃、空腸、回腸、盲腸を時計回りに滑らかにし、胃と盲腸をそれぞれ左側と右側に固定します。実体顕微鏡の透過型光源をONにし、腸をピンで固定して、解離した腸間膜動脈を露出させます。次に、鉗子で動脈の周りの脂肪組織を固定し、解剖ハサミですべての結合組織を切り取って動脈を慎重に分離します。鉗子で余分な動脈をつかみ、腸間膜動脈の木を冷たいカルシウムイオンフリーH-T溶液に移して浸します。腸間膜アーケードの腸壁に近位の動脈の1.4ミリメートル部分を切り取り、2つの鉗子を使用してこの動脈セグメントの両側を慎重に開きます。長さ2.5センチメートルのステンレス鋼線の2つのセグメントを準備し、それらを同じ皿に置きます。鉗子を使用して、動脈の一方の端を優しく固定します。次に、別の鉗子を使用して、2本のワイヤーを動脈の内腔に1本ずつ慎重に挿入します。ワイヤーがまっすぐに保たれ、内皮に触れないようにしてください。2つの鉗子を使用して、ねじ付き容器の外側に両方のワイヤーを同時にクランプし、容器をペトリ皿からH-T溶液で満たされたミオグラフチャンバーに慎重に移します。チャンバーのジョーをねじ込んで取り付け用のスペースを確保し、挿入された2本のワイヤーの両側を2本の鉗子でつかみ、容器をジョーの隙間に置きます。クランプされたワイヤーの両側を、マイクロメータに接続されたジョーのネジに巻き付けます。左側のネジを時計回りにひねって固定します。次に、鉗子を使用してワイヤーをまっすぐにします。次に、右側のネジを時計回りにひねって固定します。血管が常に顎の隙間の内側にあることを確認してくださいが、損傷を避けるために顎に触れないでください。マイクロメータを使用して2つのジョーを閉じます。2つのジョーが十分に接近しているが、互いに接触していないこと、および固定されていないワイヤーが固定ワイヤーの上にあることを確認してください。右側の鉗子を使用して、フォーストランスデューサーに接続されたジョーの角でネジを緩めたワイヤーを慎重に折り、右側のネジに時計回りに巻き付けます。次に、ネジを固定します。ワイヤーの左側を広げて巻き付け、左側のネジを固定します。次に、マイクロメーターを慎重に回転させて、2つのジョーの間のギャップが2本のワイヤーにちょうど収まるように、血管を伸ばさずにジョーを少し離します。次に、鉗子を使用して、マイクロメートル側のワイヤーをトランスデューサー側のワイヤーの水平面に移動します。他のチャンバーに動脈を取り付けた後、すべてのチャンバーを機器に接続し、チャンバーを覆います。100%酸素供給と温度プローブを取り付け、摂氏37度まで加熱を開始します。チャート作成ソフトウェアを開きます。スタート」ボタンを押して録音を開始します。[DMT] メニューから目的のチャネルを選択して、対応するチャネルの DMT 正規化ウィンドウを開きます。ウィンドウに次の定数値を入力します:組織エンドポイントa1、0.1;組織エンドポイントa2、4;ワイヤー直径、40。ウィンドウには、計算された容器の長さが 1.40 ミリメートルとして表示されます。適切な組織チャンバーのマイクロメーターを読み取ります。マイクロメーターの読み取りボックスに値を入力し、[ポイントの追加]ボタンをクリックします。この値は X の初期値で、60 秒の遅延の後、このマイクロメートル値に対応する力と有効圧力がウィンドウに表示されます。同時に、マイクロメーター読み取りボックスがアクティブになります。マイクロメータを反時計回りに回して、正規化されている血管を伸ばします。マイクロメータの値をマイクロメータの読み取りボックスに入力し、[ポイントの追加]ボタンをクリックします。再度 60 秒の遅延時間待ちます。容器をIC-oneに伸ばすために必要な計算されたマイクロメータ設定であるマイクロメータX-oneの値がウィンドウに表示されるまで、容器を伸ばし、マイクロメータ値を追加し続けます。マイクロメータをX-one値に設定します。正常化後、チャンバー内で血管を15〜20分間平衡化します。平衡化したら、H-T溶液を5ミリリットルの高カリウム溶液に置き換えて、10分間収縮を誘発することにより、高カリウム溶液で血管に挑戦します。新鮮な高カリウム溶液で10分間のインキュベーションを繰り返した後、5ミリリットルのH-T溶液で3〜4回洗浄します。再度、収縮を誘発するために5ミリリットルの高カリウム溶液で容器に挑戦します。5分後、0.5マイクロリットルのネオリエンシニンストック溶液をチャンバーに加え、最終濃度の1マイクロモルのネオリエンシニンで血管をリラックスさせます。.数分後に力が安定したら、さらに0.5マイクロリットルのネオリエンシニン原液を加えて、濃度を2マイクロモルに増やします。毎回1マイクロリットルのストック溶液を添加して、濃度を4、6、8、10マイクロモルに増やし、用量反応曲線を生成します。正規化手順では、IC-100の値に達するまで血管を数回引き伸ばし、各伸ばしたサイクルには、60秒での強力な収縮、急速な緩和、および力の維持が含まれていました。高カリウム溶液によって誘発される血管平滑筋の収縮は、通常、堅牢な段階と持続的な段階の2つの段階を示しました。我々は、マルチワイヤー筋グラフシステムを用いてマウス腸間膜動脈の等尺性収縮性を測定する方法について説明した。この方法は、血管平滑筋の機能を評価し、平滑筋の弛緩薬をスクリーニングするために使用できます。この方法と他の方法の主な違いは、取り付け手順にあります。ここで使用するこの手順は簡単に実行でき、組織やデバイスに損傷を与えることはありません。この手順に続いて、EPやアンジオテンシンIIなどの他の刺激装置を使用して平滑筋の収縮を刺激し、このアゴニストに敏感な新薬を見つけることができます。

isometric-contractility-measurement-mouse-mesenteric-artery-using

Research

JoVE Journal

Medicine

医学

分離された腸間膜動脈における力測定のための自動化された筋運動記録法の方法が記載されている。それは、フェニレフリンと細胞外カルシウムに対する応答を決定するために510A Mulvany -ハルパーンオートデュアルワイヤーミオグラフを採用しています。 300μmの、独立して -...

自動ワイヤの筋運動記録法を用いた腸間膜動脈の収縮と弛緩の研究

圧力筋運動記録法では、容器の無傷の小セグメントは、2つの小さなカニューレに取り付けられて、適切な内腔の圧力に加圧した。ここでは、マウス3の血管弛緩応答を測定する方法を説明...

圧力筋運動記録法を用いたマウス抵抗動脈機能を評価

圧力筋運動記録法は、加圧されたときに、持続収縮を開発する小動脈の血管作用を評価するために使用されます。この原稿は、ラット、血管作用と血管径の管腔内圧力の影響から小腸間膜動脈の単離されたセグメントに評価するための詳細なプロトコルを提供します。...

圧力筋運動記録法を用いた抵抗腸間膜動脈における筋原性応答および血管作用を評価します

マウスの左心室の乳頭筋は 、インビトロで心筋収縮性を調べるために使用することができます。この記事では詳細に心臓収縮特性を研究するためのアイソレーションと実験プロトコルを説明しています。...

マウスの心臓変力作用の調​​査のために分離された乳頭筋の収縮の測定

このプロトコルは、マウスから単離された腸間膜動脈の貫壁性等角張力を評価するためのワイヤ myography...

血管周囲脂肪組織による変調に焦点を当てた孤立腸間膜動脈を用いた血管緊張応答性の評価

本プロトコルは、マウス大動脈内皮機能の実験的 ex vivo...

テンソメトリック小容量チャンバーミオグラフィを用いたマウス胸部大動脈の内皮依存性血管弛緩の測定

我々はビデオで腔内モノフィラメントを使用して成体マウスの中大脳動脈閉塞を製造する方法を示しています。我々はまた、2,3,5 -...

中大脳動脈閉塞のマウスモデル

中大脳動脈（MCA）ライゲーションは、動物モデルでの局所脳虚血を研究する技術です。この方法では、中大脳動脈は開頭術によって公開されており、焼灼によって連結した。このメソッドは、非常に再現性の梗塞量と利用可能な他の方法に比べて増加した術後の生存率を与える。...

マウスの永久中大脳動脈結紮の応用

内皮グリコカリックス/内皮表面層は、理想的には生体顕微鏡を用いて研究されています。生体顕微鏡検査は、肺などの臓器に移動技術的に困難である。私たちは、同時明視野と蛍光顕微鏡を自由に移動させる際に内皮表面層の厚さを推定するために使用することができる方法を示してい...

マウス肺内皮表面層の in vivo測定における

小腸は、しばしば、血流に影響を与える負栄養吸収に影響を与える可能性が毒素に暴露される。 multimyographおよび腸間膜動脈および静脈の分離株を使用して、目的の化合物または毒素は、血管作用についてスクリーニングすることができる。...

バイオアッセイとしてウシ腸間膜動脈と静脈の切片を分離して使用すると、小腸で血管作用をテストするために

学ぶワイヤー図法によるマウス腸間膜動脈の等尺性収縮力測定。血管平滑筋の収縮機構と高血圧治療薬のスクリーニングに有用な手法です。

ワイヤー図法を使用してマウスの腸間膜動脈の等尺性収縮力測定

さらに動画を探す