Name: 소프트 Musculoskeletal 조직에서 줄기 세포를 분리 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2010-07-05T17:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 49 s
Description: 배우세요 골격근 연골 조직에서 성체 줄기 세포를 분리하는 방법을. 생검, 효소 소화, 반복적인 전 배양 단계를 통해 세포를 분리하고 면역형광법으로 특성을 분석합니다. 이 기술은 재생의학 연구에 활용됩니다.

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저자는 현재 영화 &#39;씨 카일 홀덴 및 슬라이드 편집 그들의 도움 씨 조나단 루카스에 대한 세포 격리 그들의 기술 도움을 양 Haiying 팬 씨와 이안 Bellayr의 크게 감사하고 있습니다. DRS : 지난 년 동안 수정된 preplate 기술의 개발에 관여했습니다 사람의 다음과 같은 목록에 많은 감사드립니다. Burhan Gharaibeh, BaoHong 카오, Deasy 브리짓, 토마스 R. 페인, Aiping 루, Hairong 펭, 히데키 오시마, 보 Zeng, Xiaodong 뮤, Kimimasa 도비타, 론 Jankowski, Makato Ikezawa. 우리는 제임스 H. 커밍, 라이언 Pruchnic, 요셉 Feduska, 레베카 C. Schugar, Haiying 팬과 제시카 Tebbets의 기술 지원에 감사하고 있습니다. 저자는 또한 근육질 영양 장애 협회 (MDA), 국립 보건원 (NIH), 국방부 (DOD), UPMC의 피츠버그의 아동 병원의학과이 작품에 대한 재정 지원을 인정하고 싶습니다 정형 외과 외과, 그리고 피츠버그 대학.

일반적으로 전체 수정 preplate 절차는 준비 1-2 일, 기술적인 절차를 수행하기 1 주, immunocytochemistry와 세포 식별로부터 2-3 일 및 줄기 세포 인구 확장의 추가 2~3주이 필요합니다. 줄기 세포 배양에 필요한 장비는 벤치 - 최고 원심 분리기, CO 2 배양기, 층류 조직 문화 후드와 형광과 디지털 카메라가 장착된 거꾸로 현미경을 포함하는 다른 세포 배양 시스템의 비슷합니다. 분리된 줄기 세포는 복제 수 있으며 현재 또는 미래의 연구 1,2을위한 액체 질소의 장기 저장할 수 있습니다. 이 절차에 사용된 모든 시약 및 재료 살균하고 무균 처리합니다. 1 단계 : 준비 <ol><li> 콜라겐 코트 조직 문화 요리와 flasks : 송아지 가죽 (일리터에 0.1 g, 시그마 - 알드리치)에서 파생된 유형 I 콜라겐. 코팅에 plasticware은 다음과 같습니다으로 1,2 앞에 설명한 T - 25 flasks, 6 또는 12 자 접시, 요리 (60 100mm, BD 팰컨). 부드럽게 콜라겐의도 코팅을 보장하기 위해 4 시간, plasticware에게 매 30 분마다 흔들어. 콜라겐 솔루션은 다음 제거됩니다. 그리고 코팅 plasticware는 다음 불임을 보장하기 위해, 자외선과 후드에 모두 조직 문화 후드의 건조 수 있으며, 마지막으로 recapped 또는 나중에 사용하기 위해 있었다. </li><li> ;, 50mL 열 Inactivated 태아 소 혈청 (FBS, Invitrogen), 50mL 호스 세럼 (HS, Invitrogen), 5 ML의 칙의 배아 추출 (시, 정확한 화학 (주) 400mL DMEM (Invitrogen DMEM, 높은 혈당) : 세포 배양 매체 준비 ) 일회용 0.22 - μm의 500 ML 살균 필터 시스템 (코닝)를 사용하여 필터링 진공 것입니다. 무균 페니실린 / 스트렙토 마이신 솔루션 (Invitrogen)가 마침내 100 단위 / ML 추가됩니다. 준비 솔루션은 최소한 한 달 동안 4 ° C에 저장할 수 있습니다. 이 솔루션은 술병에서 세포를 분리하는 데 사용되는 경우 분할 문화 또는 이식을위한 세포를 준비. </li><li> 세포 분리를위한 솔루션을 따뜻하게 다음 시약 37을 예열해야 ° C 세포 분리 위해 사용하기 전에 : 행크의 버퍼 소금 솔루션 (HBSS, Invitrogen), 0.2 % (WT / 권) collagenase 타입 XI (시그마 Dispase 2.4 units/1mL (Invitrogen), 0.5 % (WT / 권) 트립신 (Invitrogen) ML HBSS 당 3,200 콜라겐 소화 단위의 평균 - 알드리치). </li><li> 준비 수술 장비를 소독 : 서로 다른 크기의 포셉, 마이크로 가위, 가위 홍채 및 / 또는 메스 블레이드 : 수술을 포함한 살균 수술 도구가 필요합니다. 또한, 15 50 ML의 폴리 프로필렌의 원심 분리기 튜브 (BD 팔콘), 셀 스트레이너 (기공 크기 70m) (BD 팔콘), 18 -, 23 - 27 - 게이지 바늘 (BD PrecisionGlide) 10 - 또는 20 - ML 무균 주사기 (BD). </li></ol> 2 단계 : 조직 biopsies, 절연 및 기계적 해리 1-4 조직 biopsies은 살균 문화 후드 아래에 수행됩니다 갓 수확 힘줄과 골격 근육을 포함은 야생 형 생쥐의 hindlimb (여성 C57BL/6J, 4-5 세 주 이하, 잭슨의 경골 또는 soleus 근육에서 얻을 수 있습니다 연구소). 모든 보이는 결합 조직, 혈관, 그리고 지방 조직은 다음 생검 샘플에서 제거됩니다. 힘줄과 근육의 조직은 다음 조심스럽게 피부와 뼈의 잔해를 제거하는 수술 해부 현미경으로 식별 및 포함된 차가운 (4 ° C) HBSS (FBS의 5 %를 추가로 보충).을 접시에 배치됩니다 분리된 조직은 다음 별도 추운 HBSS를 포함하는 콜라겐 코팅 요리에 위치하고 있으며 마이크로 가위 및 / 또는 메스 블레이드를 사용하여 굵은 슬러리에 (&lt;1x1 mm 3) 다진 것입니다. 3 단계 : 조직의 효소 소화 : 다진 조직 단계 2,4,5 일련의를 통해 다음 효소 dissociated입니다 <ol><li> 별도의 15 ML 튜브와 4 ~ 3,500 rpm으로 원심 분리기 ° C 5 분에 다진 조직 slurries을 전송합니다. </li><li> 뜨는 제거 HBSS로 세척하고 다시 원심 분리를 반복합니다. </li><li> 뜨는을 제거하고, prewarmed 0.2 % collagenase 타입 XI (시그마)의 10 ML을 추가하여 이러한 slurries을 소화. 37 60 분에 대해 품어 ° C 연속적으로 부드럽게 튜브 락을하면서. 또는 수동으로 매 10 분 흔들. </li><li> 원심 분리기 10 ML dispase (2.4 단위 / ML, Gibco) 솔루션에서 이러한 slurries을 resuspend. 손을 떨고 또는 부드럽게 매 10 분 로킹, 37 ° C에서 45 분에 대해 품어. </li><li> 0.2 % 트립신의 HBSS 용액 10 ML 이러한 slurries을 원심 분리기 다시 일시 중지합니다. 부화는 하나의 세포가 현미경으로 정학을 준수하여 수행할 수있는 조직에서 발표되는 수있는 정도에 따라 달라집니다. 그것은 반전 튜브 ° 37 30 분을 초과하는 C를 권장하거나 부드럽게 매 10 분 락을하지 않습니다. </li><li> 결과 세포를 원심 분리기S 다시 중단 확산 중간 (PM) 10 ML에있는 세포 펠릿합니다. </li><li> 바늘 일련의를 통해 추출을 통과하여 세포 현탁액을 떼어 놓다. 세포가 다음 18G 통해 23G를 2 번 통과하고, 마지막으로 27G 바늘입니다. </li><li> 70 μm의 셀 스트레이너를 통해 세포 추출물 패스. </li></ol> 4 단계 : 세포 접착 률 1-3에 따라 서로 다른 세포 집단을 분리 Preplating <ol><li> 원심 분리기 및 확산 매체 셀 알약을 resuspend. </li><li> 플레이트 셀룰라 콜라겐 - 코팅 T - 25 플라스크 (또는 60mm 요리)에 혼합하고 PP1로 표시합니다. 세포 현탁액은 현미경으로 굴절 핵 및 다른 파편의 큰 숫자를 가진으로 관찰해야합니다. </li><li> 37 품어 ° 2 시간 동안 humidified 5 % CO 2 배양기에서 C. </li><li> T - 25 플라스크 (또는 60mm 요리) 마크가 PP2 그대로 새로운 콜라겐 - 코팅에 nonadherent 세포를 전송합니다. PP1 표시 접시에 PM 5 ML을 추가합니다. 플라스크에 연결 초기 준수 세포가 대부분 myofibroblasts 삼아르. </li><li> (또는 접시) T - 25 플라스크 새로운 콜라겐 - 코팅에 nonadherent 세포를 전송하고 PP3로 표시, 24 시간 동안 인큐베이터에 flasks를 반환합니다. PP2 표시된 판으로 확산 중 5 ML을 추가합니다. 이 플라스크에 연결이 준수 전지는 대부분 섬유아 세포 2,3입니다. </li><li> 인큐베이터에 flasks를 반환하고 인구 PP6가 만들어 때까지 또 다른 24 시간의 절차를 반복하십시오. 정지 세포의 각 그룹을 유지하고 세포 분열 따위에 의해 번식하고 거꾸로 현미경을 사용하여 정기적으로 그들을 검토하도록 허용합니다. 근육 위성 세포가 자주 PP5 2 주로 볼 수있는 동안 PP3 - PP4은 대부분 myoblasts 있습니다. </li><li> 천천히 준수 세포의 대부분은 일반적으로 PP6로 연결합니다. 이 단계에서는 세포가 작고, 둥근, 빛의 굴절을 표시하고 번호 매우 희박한 있으며 줄기 세포의 인구 1,2로 간주됩니다. </li></ol> 5 단계 : 식별 및 격리 줄기 세포의 확장 <ol><li> 고립된 PP6 세포 수가 거의하고 매일 변경됩니다 FBS 풍부한 확산 중간 (20 % DMEM에 FBS)의 유지 관리해야합니다. 세포의 대부분은 culturing의 다음 1~2주 동안 PP6 문화 다이에 존재하지만, 대형, 건강 PP6 인구는 일반적으로 확장 추가 1-2주 후에 생성됩니다. 생쥐에서 분리된 줄기 세포는 고도로 줄기 세포 항원 1 (Sca1), CD34, 태아 간 키나제 1 (Flk1) 및 immunocytochemical 얼룩을 통해 시각 수있는 다른 줄기 마커 1,2,6,7을 표현. 이러한 줄기 세포는 여러 차별화 용량에게 3,6,8를 나타냅니다. </li><li> 고립된 세포 유지와 차별화 1,2를 피하기 위해 (물론이나 술병이나 접시에 &lt;20-30%의 합류 12 잘 50-100 세포에서 요리 /) 문화의 낮은 세포 밀도로 확장됩니다. 매우 세포 몇 확장 중에 클론을 형성하고, 이러한 복제 줄기 세포가 다른 능력 연구에 대한 오랜 시간이 확산 (LTP)를 받아야 수 있습니다. 복제된 줄기 세포는 10 % DMSO로 오후 중간 예를 들어, 일반적인 세​​포 저장 프로 시저를 사용하여 액체 질소에 저장할 수 있습니다. 다른 뒤로 최대 연구를위한 줄기 세포의 낮은 통과 주식의 번호를 확인합니다. </li></ol>

<ol><li>Gharaibeh, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+a+slowly+adhering+cell+fraction+containing+stem+cells+from+murine+skeletal+muscle+by+the+preplate+technique%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Protoc%22%5BJournal%5D)">Isolation of a slowly adhering cell fraction containing stem cells from murine skeletal muscle by the preplate technique.</a> Nat Protoc. 3, 1501-1509 (2008).</li>
<li>Qu-Petersen, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Identification+of+a+novel+population+of+muscle+stem+cells+in+mice%3A+potential+for+muscle+regeneration%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Identification of a novel population of muscle stem cells in mice: potential for muscle regeneration.</a> J Cell Biol. 157, 851-864 (2002).</li>
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<li>Gates, C. B., Karthikeyan, T., Fu, F. &amp, Huard, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Regenerative+medicine+for+the+musculoskeletal+system+based+on+muscle-derived+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22J+Am+Acad+Orthop+Surg%22%5BJournal%5D)">Regenerative medicine for the musculoskeletal system based on muscle-derived stem cells.</a> J Am Acad Orthop Surg. 16, 68-76 (2008).</li>
</ol>

관심 없음 충돌 선언하지 않습니다.

그것은 일부 성인 조직이 여러 개의 줄기 세포가 포함되어있다는 사실을 인정했습니다. 연구의 지난 몇 년 동안, 줄기 세포는 골격근과 힘줄을 포함한 부드러운 musculoskeletal 조직에서 발견되었습니다. 성공적으로 힘줄과 골격 근육에서 성인 줄기 세포를 분리하기 위해 실험실에서 사용되었습니다 수정된 preplate 기술로 알려진이 현재의 프로토콜은 세부 절차를. 세포 위에서 설명한 수정된 preplate 기술을 사용하는 것은 콜라겐 코팅 flasks (그림 1) 자신의 접착 특성에 따라 여러 집단으로 나눌 수 있습니다. 조직 내에서 발견 섬유아 세포와 myofibroblasts 신속하게 24-48 시간 이내에 콜라겐 코팅 flasks을 준수하고 처음 PP1 - PP2에있는 다른 세포로부터 분리 수 있습니다. myogenic 또는 내피 세포가 48~96시간 이내에 긴 기간 (PP3 - PP5) 이후 콜라겐 코팅 flasks을 준수하고, 수확 및 세포 표면 마커에 의해 확인할 수 있습니다. 나중에 preplated 세포, 9...

<table><tbody><tr><td>DMEM</td><td>Invitrogen</td><td>#11995-073</td><td></td></tr><tr><td>FBS</td><td>Invitrogen</td><td>#10437-028</td><td></td></tr><tr><td>열불활성화 말 혈청</td><td>Invitrogen</td><td>#26050-088</td><td></td></tr><tr><td>닭 배아 추출물</td><td>Accurate Chemical</td><td>#CE650T-10</td><td></td></tr><tr><td>100U ml penicillin/streptomycin</td><td>Invitrogen</td><td>#15140-122</td><td></td></tr><tr><td>Dulbecco's PBS</td><td>Invitrogen</td><td>#14190-250</td><td></td></tr><tr><td>Hank's Buffered Salt Solution</td><td>Invitrogen</td><td>#24020-117</td><td></td></tr><tr><td>Collagenase type XI 0.2%(wt/vol)</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#C7657</td><td></td></tr><tr><td>Dispase 2.4U ml</td><td>Invitrogen</td><td>#17105-041</td><td></td></tr><tr><td>Trypsin-EDTA 0.5%(wt/vol) (10x; 5g liter trypsin (1:250)</td><td>Invitrogen</td><td>#15400-054</td><td></td></tr><tr><td>플라스크 코팅용 콜라겐: 송아지 피부 유래 Type I collagen 0.1 g liter</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>#C-9791</td><td></td></tr><tr><td>DMSO</td><td>Sigma</td><td>#D-2650</td><td></td></tr></tbody></table>

소프트 musculoskeletal 조직에서 줄기 세포를 분리

Isolating Stem Cells from Soft Musculoskeletal Tissues

성인 줄기 세포는 긴 재생 의료에서​​ 응용 프로그램에 관해서 논의했습니다. 성인 줄기 세포는 여러 혈통이 세포 분화 및 자기 갱신 능력을 받아야하기 때문에 그들의 인상적인 기능으로 부상하고 병에 걸린 조직을 치료에 대한 흥분의 큰 거래를 생성합니다. 가장 중요한 것은, 이러한 자질은 autologous 세포 이식 요법에 사용하기 위해 그들이 유리 만들었습니다. 현재 프로토콜은 musculoskeletal 시스템, 예를 들어, 힘줄 및 근육의 부드러운 조직 1의 수정된 preplate 기술에 독자를 소개합니다<sup&gt; 일</sup&gt; 매체와 콜라겐 코팅 flasks에 배치 효소 dissociated 후. 중간 나머지 부동 세포로 구성되어 있습니다 뜨는은, 순차적으로 새로운 flasks 매일 전송됩니다. 줄기 세포는 일반적으로 (시리얼 전송 또는 preplates) 5-7일 소요되는 flasks을 준수하기 위해 느린 있습니다. 이 방법을 사용하여, 성인의 줄기 세포가이 조직에있는 쉽게 상당히 비침습 절차를 통해 수확 수 있습니다.

플라스크에 세포의 준수 속도에 따라 musculoskeletal 부드러운 조직에서 분리 성인 줄기 세포.

소프트 Musculoskeletal 조직에서 줄기 세포를 분리

성체 줄기세포는 재생 의학으로의 응용과 관련하여 오랫동안 논의되어 왔습니다. 성체 줄기세포는 상당한 양의...

이 절차의 전반적인 목표는 골격근과 같은 근골격계 연조직에서 성체 줄기세포를 분리하는 것입니다. 이는 먼저 연조직 생검을 수행한 후, 조직을 제거하고 미세하게 다짐으로써 이루어집니다. 이 절차의 두 번째 단계는 조직을 효소로 분해하는 것입니다.절차의 세 번째 단계는 반복적인 사전 배양(pre plating) 단계를 통해 줄기세포를 분리하는 것입니다. 절차의 마지막 단계는 분리된 줄기세포를 확인하는 것입니다. 최종적으로 면역형광법, 현미경 관찰 및 유세포 분석법을 사용하여 세포의 형태학적 및 세포학적 거동을 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.안녕하세요, 피츠버그 대학교 정형외과 분자병리학 연구실의 y Lee입니다. 오늘은 골격근과 같은 근골격계 연조직에서 성체 줄기세포를 분리하는 방법을 보여드리겠습니다. 안녕하세요, Johnny Ward 박사입니다.저는 피츠버그 대학교 의과대학 정형외과 교수로 재직 중입니다. 저는 Young Lee 박사와 긴밀히 협력하여 골격근 및 표준과 같은 다양한 조직으로부터 줄기세포를 분리하는 절차를 연구해 왔습니다. 저희 연구실에서는 기본적으로 중개 의학 응용을 위한 연구 연구용 줄기세포를 분리하기 위해 이 절차를 사용하고 있습니다.이제 연구를 시작하겠습니다. 줄기세포를 분리할 수 있는 조직으로는 야생형 마우스의 뒷다리 경골 또는 가자미근에서 채취한 힘줄과 골격근을 사용할 수 있습니다. 피부와 뼈의 잔해를 제거한 후, 5% FBS가 첨가된 차가운 HBSS가 담긴 접시에 조직을 넣으십시오.다음으로, 차가운 HBSS가 담긴 콜라겐 코팅 디쉬에 조직을 각각 놓습니다. 조직 해리와 소화의 기본 절차를 시연하기 위해 골격근 조직을 사용하겠습니다. 미세 가위 또는 메스 날을 사용하여 골격 조직을 거친 슬러리 형태로 잘게 다져 조직의 효소 소화를 준비합니다.먼저 MIT 조직 슬러리를 각각의 15 milliliter 튜브로 옮긴 후, 4 °C에서 약 3,500 RPM으로 5분 동안 원심분리합니다. HBSS로 재현탁하여 세척액을 제거하고 원심분리를 반복합니다. 상층액을 제거한 후, 미리 데워둔 0.2% collagenase 10 milliliters를 첨가하여 슬러리를 소화시킵니다.Type 11을 37°C에서 60분 동안 배양하며, 10분마다 튜브를 손으로 흔들어 줍니다. 60분 배양이 완료되면 원심분리한 후, 슬러리를 10 mL의 DYS space solution에 재현탁합니다. 37°C에서 45분 동안 배양하며 10분마다 손으로 흔들어 줍니다. 45분 배양 후 원심분리하고, 슬러리를 10 mL의 0.2% trips in HBSS solution에 재현탁합니다.일반적으로 37 °C에서 15분에서 20분 동안 배양하며, 10분마다 튜브를 반전시켜 줍니다. 배양이 완료되면, 여기에 나타낸 것과 같이 조직으로부터 충분한 단일 세포가 방출되었을 때 결과 세포들을 원심 분리하고, 세포 펠릿을 5 mL의 증식 배지(PM)에 재현탁합니다. 추출물을 일련의 바늘에 통과시켜 세포 현탁액을 해리시키는데, 18 gauge 바늘로 2회, 23 gauge 바늘로 1회, 마지막으로 27 gauge 바늘로 1회 통과시킵니다.마지막으로, prepl 기술을 시작하기 위해 세포 추출물을 70 micron 세포 스트레이너에 통과시킵니다. 방금 준비한 세포 추출물을 원심분리하고 펠릿을 증식 배지에 재부유시킵니다. 세포 혼합물 5 mL를 콜라겐 코팅된 T 25 플라스크에 분주하고 PP1으로 표시한 후, 가습된 5% carbon dioxide 인큐베이터에서 37 °C로 2시간 동안 배양합니다.2시간 후, 부착되지 않은 세포를 새로운 콜라겐 코팅 T 25 플라스크로 옮기고 PP two로 표시합니다. 이전의 T 25 플라스크(PP one으로 표시됨)에 PM 5 mL를 추가합니다.두 플라스크를 모두 인큐베이터에 넣고 24시간 동안 배양합니다. 24시간 후, PP two에서 부착되지 않은 세포를 새로운 collagen ENC 코팅 T 25 플라스크로 옮기고 PP three로 표시합니다. PP two로 표시된 플라스크에 증식 배지 5 mL를 첨가합니다.플라스크를 인큐베이터로 다시 옮깁니다. 인구 집단 PP 6이 될 때까지 24시간마다 이 절차를 반복합니다. 줄기세포 집단이 생성되었습니다.분리된 PP six 세포는 그 수가 매우 적으므로 FBS가 풍부한 증식 배지에서 유지해야 하며, 배지는 매일 교체해 주어야 합니다. 다만, 이후 1~2주간의 배양 과정 동안 PP six 배양액 내 대부분의 세포가 사멸하게 됩니다.일반적으로 1~2주의 추가 배양 기간을 거쳐 충분한 수의 건강한 PP six 집단을 생성합니다. 다른 모든 부유 세포 그룹 또한 동일하게 유지하며, 이들이 증식하도록 유도하고 도립 현미경을 사용하여 정기적으로 관찰하십시오. PP one 및 PP two 플라스크에 초기에 부착되는 세포들은 대부분 섬유아세포입니다.48~96시간의 더 긴 시간 동안 콜라겐 코팅 플라스크에 부착된 세포들입니다. PP3와 PP4는 대부분 근모세포입니다. 근육 위성 세포는 주로 PP5에서 관찰되는 반면, 96시간 이후의 후기 전배양(prepl) 세포인 PP6는 성체 줄기세포로 간주되며 작고 둥글며 투명하게 보입니다.분리 초기 단계에서, stem cell, antigen one 및 CDC 34와 같은 줄기세포 마커의 발현을 확인하기 위한 면역조직화학 염색을 통해 추가적인 특성 분석이 가능합니다. 지금까지 마우스의 골수에서 줄기세포를 분리하는 방법을 살펴보았습니다. 이 과정을 수행할 때는 모든 단계에서 멸균 상태를 유지하는 것이 중요합니다.줄기세포를 분리한 후에는, 세포의 줄기세포 특성을 유지하기 위해 해당 세포들을 저밀도로 배양하십시오. 이것으로 모든 과정을 마칩니다. 시청해 주셔서 감사하며, 여러분의 연구에 행운이 깃들기를 바랍니다. 또한 귀하의 실험에 이 방법을 성공적으로 적용하시길 기원합니다.감사합니다.

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Research

연구

JoVE Journal

Biology

생물학

이 비디오는 태아의 난황과 대동맥 - 생식선 - mesonephros 영역을 미세 절개하다 및 조혈 줄기 세포를 정렬 유동세포계측법를 사용하는 방법을 보여줍니다.

Murine 난황과 AGM에서 조기 조혈 줄기 세포의 분리

마이크로 해부 explants 기술은 골격 근육 줄기 세포의 원천으로 청소년, 성인이나 배아 근육에서 proliferative 골격근 세포를 분리를위한 강력하고 안정적​​인 방법입니다. 유니 클리,이 세포는 clonally 생체내 이식에 사용되는 골격 근육 줄기 세포 라인을 생산하기 위해 파생되었습니다.

성인 및 배아 골격근의 Microexplant 문화 및 골격 근육 줄기 세포의 분리

정지 위성 세포의 순수 인구의 분리 및 배양은 근육 줄기 세포 집단은 근육 줄기 세포 생물학 및 재생뿐만 아니라, 근육 퇴행 위축 및 기타 퇴행성 질환의 치료를위한 줄기 세포 이식의 이해에 중요하다.

근육 위성 세포의 분리, 문화, 및 이식

재생 애플리케이션에 이상적이다 인간의 골격 근육 항구 여러 멀티 혈통 전구체 집단 내에서 혈관. 내막 근육 조직에서 혈관 내피 세포, 혈관 주위 세포 매체 및 외막 세포 외막에서이 분리 방법은 혈관의 세 층 구조에서 각각 세 능성 전구 세포 집단의 동시 정제를 허용한다.

인간의 골격 근육에서 혈관 유래 다 능성 전구체의 분리

이 프로토콜은 근육 또는 피부 조직에서 근육 및 섬유아세포 세포주의 살아있는 세포를 분리하고 1차 배양하는 기술을 설명합니다.  이러한 세포주를 불멸화하는 기술도 설명됩니다.  전체적으로 이러한 프로토콜은 다운스트림 애플리케이션을 위해 환자 유래 세포를 생성하고 보존할 수 있는 신뢰할 수 있는 도구를 제공합니다.

질병 모델링을위한 근육 조직 검사에서 환자 유래 세포주의 분리 및 멸화

섬유-지방형성 전구세포(FAP)와 근육 줄기세포(MuSC)의 정확한 식별은 생리학적 및 병리학적 조건에서 생물학적 기능을 연구하는 데 중요합니다. 이 프로토콜은 성인 마우스 근육에서 FAP 및 MuSC의 분리, 정제 및 배양에 대한 지침을 제공합니다.

교란되지 않고 손상된 마우스 골격근에서 섬유 지방 형성 전구 세포 및 근육 줄기 세포의 FACS 분리 및 배양

우리는 Hoxb5 리포터 시스템을 사용하여 장기 조혈 줄기 세포(LT-HSC) 및 단기 HSC(ST-HSC)의 분리를 위한 단계별 프로토콜을 제시합니다.

장기 및 단기 조혈모세포의 분리 방법

이 프로토콜은 마우스의 개별 골격근에서 근육 줄기 세포와 섬유 지방 생성 전구체의 분리를 설명합니다. 이 프로토콜에는 단일 근육 해부, 형광 활성화 세포 분류에 의한 줄기 세포 분리, 면역형광 염색에 의한 순도 평가, 5-ethynyl-2'-deoxyuridine 혼입 분석에 의한 S상 진입의 정량적 측정이 포함됩니다.

개별 골격근에서 정지 줄기 세포 집단의 분리

여기에서는 쥐 뼈, 골수, 흉선 및 단일 세포 다생물체학(single-cell multiomics)과 호환되는 인간 흉선 조직에서 기질 세포를 분리할 수 있는 프로토콜을 제시합니다.

조혈 장기에서 기질 세포 분리(Stromal Cell Isolation from Hematopoietic Organs)

이 프로토콜은 조직 해리, 순차적 여과, 사전 플레이트 및 정의된 배양 조건을 통해 성체 및 신생아 마우스 골격근에서 1차 근모세포를 분리하고 농축하는 표준화된 방법을 제공하여, 위성 세포 유래 근아세포 배양을 하위 실험 응용으로 구축하고 유지할 수 있게 합니다.

시험관 내 근형성 연구를 위한 골격근 위성 세포 분리

배우세요 골격근 연골 조직에서 성체 줄기 세포를 분리하는 방법을. 생검, 효소 소화, 반복적인 전 배양 단계를 통해 세포를 분리하고 면역형광법으로 특성을 분석합니다. 이 기술은 재생의학 연구에 활용됩니다.

소프트 Musculoskeletal 조직에서 줄기 세포를 분리

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