C.エレガンス ゴナド押出:急速解離技術

- M9バッファーを含むチューブ内で、開発の望ましい段階で最大150個の雌雄同体ワームを採取します。

上清を取り除く際に解剖顕微鏡でチューブを見て、試料の損失を防ぎます。 M9バッファーの最小量でガラス皿にワームを移します。

2つの球根状の構造を含むワームの頭部と咽頭、または前腸を見つける。咽頭の後ろのワームを切り裂くために2本の針を使用した。

キューティクルが破壊されると、2本の生殖腺の腕は、ワームの内圧のために押し出されるか、体から押し出される。

この例では、免疫蛍光分析のために成虫の生殖腺を解剖します。

- 所望の発達段階で100〜150個のワームを選び、M9バッファの100マイクロリットルを含む1.5ミリリットルのマイクロ遠心分離管に集め、マイクロ遠心チューブにM9バッファの900マイクロリットルを充填し、遠心分離機を1,000gで1,000g室温で1,000gで充填します。

解剖顕微鏡の下で、M9バッファーの900マイクロリットルを静かに取り除き、次に、さらに2回洗浄を繰り返して、付属の細菌のほとんどを除去します。

次に、200マイクロリットルのマイクロピペットチップを広げたボアで、M9バッファ100マイクロリットルのワームを平らな底ガラス時計皿に移します。

解剖顕微鏡の下で、各ワームの下と上に各針を置き、動きのようなはさみを使用して2番目の咽頭球の近くの各ワームに細かいカットを行います。

-料理中の動物の解剖を5分以内に完了することが非常に重要です。

- 押し出された生殖腺が見えない場合は、その動物を飛ばすだけです。