Encyclopedia of Experiments: Biology
A subscription to JoVE is required to view this content. Sign in or start your free trial.
Transcript
Please note that all translations are automatically generated.
- I et rør som inneholder M9-buffer, samle opp til 150 hermafroditt ormer på ønsket utviklingsstadium. Fjern bakterier fra ormene ved å vaske med M9 buffer og sentrifugere prøven.
Se røret under et dissekerende mikroskop når du fjerner supernatanten for å forhindre tap av prøve. Overfør ormene til en glassfat med et minimalt volum M9-buffer. Tilsett levamisol for å bedøve ormene.
Finn ormens hode og svelget, eller foregut, som inneholder to pæreformede strukturer. Brukte to nåler til å skjære gjennom ormen bak svelget.
Når kutiklet er forstyrret, ekstruderes de to gonadarmene eller skyves ut av kroppen på grunn av ormens indre trykk.
I dette eksemplet vil vi dissekere gonader fra voksne ormer for immunfluorescensanalyse.
- Velg 100 til 150 ormer på ønsket utviklingsstadium og samle dem i et mikrocentrifugerør på 1,5 milliliter som inneholder 100 mikroliter M9-buffer. Fyll deretter mikrocentrifugerøret med 900 flere mikroliter M9 buffer og sentrifuger det ved 1000 ganger g i 1 minutt ved romtemperatur.
Under et dissekerende mikroskop fjerner du forsiktig 900 mikroliter av M9-bufferen. Gjenta deretter vasken to ganger til for å fjerne de fleste vedlagte bakterier.
Deretter, ved hjelp av en 200-mikroliter mikropipettespiss med en utvidet boring, overfør ormene i 100 mikroliter M9 buffer til en flat bunnglassklokkerett. Deretter legger du til 1 til 3 mikroliter med 0,1 molar levamam til parabolen og virvler den forsiktig. Nå, fest to 25-gauge nåler til to sprøyter for å lage en dissempende verktøy for hver hånd.
Under et dissekerende mikroskop plasserer du hver nål under og over hver orm og lager et fint kutt på hver orm nær den andre faryngealpæren ved hjelp av en saks som bevegelse. Klipp alle dyrene minst en gang i løpet av fem minutter for at levamisolen skal være effektiv.
- Det er svært viktig at disseksjonen av dyrene i retten fullføres på under fem minutter.
- I tilfelle en ekstrudert gonad ikke er synlig, bare hopp over det dyret.
