절연 골격근의 묘 - 기계 분석

이 절차의 목적은 유전자 변형 또는 치료의 효과를 정량화하는 방법으로 고립된 골격근의 생성된 힘과 피로성을 결정하는 것입니다. 먼저, 쥐의 뒷다리에서 가장 긴 신근 디지토럼(extensor digitorum)을 절개합니다. 그런 다음 근육은 근육 스트립 myo에 장착됩니다.

다음 단계는 최대 경련 긴장이 달성되는 근육의 자극 및 프리텐션에 대한 전압을 확인하는 것입니다. 마지막 단계는 근육에 대한 힘의 빈도 관계뿐만 아니라 저주파에서 타닉 자극에 대한 피로의 시작과 정도를 결정하는 것입니다. 궁극적으로, 근조영술을 통해 근육의 기계적 성질에서 측정 가능한 변화를 보여주는 결과를 얻을 수 있습니다.

운동 테스트와 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 근 조영술을 통해 근력과 기능을 정량적으로 평가할 수 있다는 것입니다. 우리는 근육 질환에 대한 새로운 세포 및 생명 공학 기반 치료법이 전임상 동물 모델에서 테스트됨에 따라 근육 기능을 평가하기 위한 정량적 측정이 필요하다는 것을 깨달았을 때 이 방법을 처음 채택했습니다. 이 방법은 근육 생물학 및 근이영양증 분야의 주요 질문, 예를 들어 특정 치료법이나 유전자 변형이 근육 기능을 변경하는지 여부와 같은 질문에 답하는 데 도움이 될 수 있습니다.

근육을 적절하게 다루는 데 필요한 단계를 마스터하기 어렵기 때문에 이 방법을 시각적으로 시연하는 것이 중요합니다. 일반적으로 이 방법을 처음 접하는 개인은 힌딘 근육의 빠른 외상성 해부에 연습과 습득된 기술이 필요하기 때문에 어려움을 겪을 것입니다. 절차를 시연하는 것은 우리 실험실에서 연구 과학자와 SAB ler가 대학원생을 징징을 울릴 때입니다.

쥐를 안락사시킨 후, 사체 복부 쪽을 위로 향하게 하여 해부 트레이에 놓고 해부 현미경으로 다리를 트레이에 고정합니다. 피부를 잘라 열고 조심스럽게 근막을 엽니다. 다음으로, 발목에서 위쪽으로 경골 전방 근육을 벗겨 신근 디지토럼 장근육 또는 EDL 근육을 노출시킵니다.

수확하는 동안 근육을 촉촉하게 유지하기 위해 젖산 링거 용액 한 방울을 사용하십시오. 그런 다음 양쪽 끝의 힘줄을 최대한 보존하고 EDL 근육 섬유 자체를 건드리지 않도록 주의하면서 EDL을 해부합니다. EDL 근육을 젖산 링거 용액이 들어 있는 페트리 접시에 넣습니다.

이제 각 근육 힘줄에 봉합사를 묶습니다. 이 연구에서는 근육을 고정하기 위해 조직 배스를 사용하고 근육 긴장을 측정하기 위해 힘 변환기를 사용합니다. 또한 사각 펄스 전기 자극기와 데이터 수집 플랫폼을 사용하여 기계적 반응을 이끌어내고, 기록하고, 분석합니다.

다음 단계는 myo 이식 수조에 6.5ml의 Krebs를 채우는 것이므로 위성 용액입니다. 목욕을 섭씨 25도로 데우고 15분 동안 거품을 일으킨 후 95%의 산소, 5%의 이산화탄소로 Krebs 용액을 거품을 냅니다. 힘줄에 봉합사를 사용하여 EDL 근육을 욕조로 옮깁니다.

근 이식편의 클램프 사이에 힘줄을 고정합니다. 근육 자체를 조이지 않도록 주의하십시오. 근 이식 수조는 섭씨 25도로 유지하십시오.

장력 해석을 시작하려면 초기 근육 길이를 inci 근육 길이와 동일하게 조정합니다. 0.5밀리초의 자극 지속 시간을 사용합니다. 최대 트위치 장력을 얻는 데 필요한 자극을 결정하기 위해 전압을 점차적으로 높입니다.

그런 다음 자극을 20% 더 높게 설정하여 일반적으로 약 40볼트인 최대 자극을 달성합니다. 다음 단계는 경련 긴장이 더 이상 증가하지 않을 때까지 근육을 서서히 스트레칭하는 것입니다. 이 길이는 최적의 근육 길이로 간주됩니다.

3분 동안 근육이 평형을 이룰 때까지 기다린 다음 근육을 최적의 길이로 유지합니다. supra maximal square 자극을 전달하고 출력 기록, twitch tension curve를 기록합니다. 이 그림에서.

최대 경련 장력은 pt로 표시됩니다. 수축 시간은 ct로 표시됩니다. 절반의 이완 시간은 HRT로 표시됩니다.

막대는 3분의 휴식 시간 후 1초를 나타냅니다. 최적의 길이에서 150Hz에서 300밀리초 동안 초최대 자극의 변형을 적용하여 타이타닉 장력을 측정합니다. 이 절차는 파상풍 장력 곡선을 생성합니다.

최대 타이타닉 장력은 po로 표시됩니다. 절반 이완 타이타닉 장력은 HRTT로 표시됩니다. 막대는 3분 휴식 후 1초를 나타냅니다.

300 6100, 140 및 160 헤르츠에서 300 밀리초의 초최대 자극 트레인을 적용하여 힘 주파수 분석을 시작합니다. 3분의 휴식 시간 후에 각 자극 트레인 사이에 3분의 휴식을 취하십시오. 짧은 타ai 60헤르츠의 열차를 300밀리초 동안 적용하고, 3초 동안 10분 x 10분씩 적용하여 피로 해석을 시작합니다.

타이타닉의 힘은 초기 값의 약 15%의 고원 수준으로 감소해야 합니다. 최적의 길이로 근육으로 힘 기록을 마친 후 현미경의 안구를 사용하여 근육 직경을 측정합니다. 그런 다음 봉합사를 제거하고 근육의 무게를 측정하여 근육량을 측정합니다.

마지막 단계는 체질량을 평가하기 위해 마우스의 무게를 측정하는 것입니다. 이러한 측정값은 함께 제공되는 기사에 나열된 계산에 사용됩니다. 이 그림은 표시된 자극 빈도가 증가함에 따라 생성되는 장력의 증가를 보여줍니다.

다음은 30Hz에서 펄스 트레인에 대한 근육의 반응입니다. 이 그림은 140 헤르츠의 펄스 트레인에서 요청되는 더 큰 힘을 보여줍니다. 이 그래프는 최대 힘 대 자극 주파수에 대한 백분율로 표시된 힘 주파수 관계를 보여줍니다.

힘 주파수 곡선의 모양은 근력의 특징이며 다른 동물의 근육을 비교하는 데 사용할 수 있습니다. 이 수치는 10분 동안 저주파 자극을 받는 동안 근육 피로를 보여줍니다. 이 수치는 표시된 시점에서 자극 열차에 대한 근육의 반응을 보여줍니다.

이 플롯은 저주파 근육 피로를 시간 대비 최대 힘 퍼센트의 플러스로 보여줍니다. 저주파 피로 곡선의 모양은 근력의 특징이며 다른 동물의 근육을 비교하는 데 사용할 수 있습니다. 이 기술을 마스터하면 이 절차에 따라 30분 안에 완료할 수 있습니다.

면역조직화학, 웨스턴 블롯 및 정량적 PCR과 같은 다른 방법을 수행하여 이 절차를 시도하는 동안 처리된 근육에서 특정 근육 단백질 및 줄기 세포 마커가 발현되는지 여부와 같은 추가 질문에 답할 수 있습니다. 근육 채취와 분석 사이의 시간을 최소화하기 위해 모든 장비를 준비하는 것을 기억하는 것이 중요합니다. 이 비디오를 시청한 후에는 뒷다리 근육을 해부하고, 덴마크 myo 기술에서 보여준 것과 같은 근육 스트립 묘에 근육을 장착하고, 기계적 특성의 변화를 측정하는 방법을 잘 이해하게 될 것입니다.