FSL은 구조 : 생물 학적 마커의 범위와 셀 / Virion 표면을 수정하기위한 간단한 방법을 자신의 생존에 영향을주지 않고

이 절차의 전반적인 목표는 살아있는 세포 또는 S의 표면을 생체 활성 구조로 무해하고 신속하게 라벨링하는 것입니다. 이는 먼저 function spacer, lipid 또는 FSL construct solution을 준비하여 수행됩니다. 다음으로, 구성 용액의 동일한 부분이 세포 또는 VIR 용액의 동일한 부분과 혼합됩니다.

세 번째 단계로, 혼합물을 섭씨 37도에서 60분 동안 배양합니다. 마지막 단계는 변형된 세포나 세포 또는 변형된 VIR 또는 VIR을 세척하고 평소와 같이 실험적으로 사용하는 것입니다. 궁극적으로 표면 변형 살아있는 세포 또는 S는 유세포 분석, 현미경 검사 및 응집을 포함한 모든 일상적인 실험 분석 기술을 통해 시각화할 수 있습니다.

공유 라벨링과 같은 기존 방법에 비해 이 기술의 주요 장점은 빠르고 견고하며 유연하며 변형된 세포 또는 Varian의 생명력에 영향을 미치지 않는다는 것입니다. FSL 구성 원액을 먼저 준비하려면 제품 파일에 1ml의 희석제를 추가하여 건조 FSL 산물을 재구성하여 1밀리리터당 1밀리그램의 원액을 생성합니다. 바이알을 30초 동안 초음파 처리하고, 육수를 100마이크로리터 멸균 용기에 분취하고, 용기를 섭씨 2도에서 8도에서 최대 일주일 동안 보관합니다.

사용 직전에 삽입할 수 있는 작동 중인 FSL 구조체 용액을 준비하려면 용액을 다시 30초 동안 초음파 처리하여 미스 세포를 균질화한 다음 FSL 구조체를 희석하고 필요한 농도로 완충합니다. Resus 현탁액을 무지질 배지에 Resus 현탁액 후 최대 일주일 동안 섭씨 2도에서 8도에서 보관하거나 PBS가 결합되어 있지 않은 지질이 없는 FSL 변형을 위해 세포를 원심분리합니다. 그런 다음 100 마이크로 리터의 희석제에 세포를 포장하고 100 마이크로 리터의 변형되지 않은 세포와 동일한 조건에서 대조군을 위해 세포를 세척합니다.

원하는 경우 적절한 희석액 100마이크로리터의 FSL 용액을 추가합니다. 이와 동시에 관련 없는 FSL 솔루션 및/또는 PBS를 사용하여 negative control도 생성합니다. 그런 다음 배양 후 섭씨 37도에서 1시간 동안 모든 세포 하위 집합을 배양합니다.

모든 세포를 무지질 배지 또는 PBS로 두 번 세척하여 유리 FSL 구축물을 제거하고 무지질 배지에 적절한 현탁액을 준비합니다. FSL 변형 과정이 완료되면 수줍은 꽃처럼 섭씨 4도에서 8도에서 보관할 수 있습니다. FSL 구조체는 기능적 머리 또는 F의 세 가지 주요 구성 요소로 구성되며, 이는 다양한 생물학적 작용기가 될 수 있습니다.

스페이서 RS는 수분 분산성을 개선하고 인간 혈청 및 DAL 지질 또는 L과 비반응성을 갖도록 기능적 헤드의 간격을 유도하도록 설계되었으며, 이를 통해 구조체가 표면 4에 자발적으로 통합될 수 있습니다. 대표적인 FSL 그룹은 다음 5개의 이미지에 나와 있습니다. 살아있는 쥐 배아를 섭씨 37도에서 2시간 동안 FSL 플루오레세인으로 직접 라벨링한 후 혈청 무 세포 배양 배지에서 세척한 후 형광 현미경으로 관찰했습니다.

이 첫 번째 이미지에서는 zop palita free two cell mirroring 배아를 볼 수 있습니다. 배아 중앙의 강렬한 염색은 전형적인 극체 염색을 대표합니다. 다음 두 이미지에서는 현미경 P 초점 밖에 있는 세포의 그림자 염색을 보이는 zop palita free 4 cell 및 eight cell mirroring embryos가 여기에 나와 있습니다.

zop palita free 16 cell mirroring 배아의 이미지는 FSL fluorescein으로 표시된 생후 4-5일 된 온전한 미러링 배아의 마지막 이미지에 표시되며, 배아와 zop LUCITA가 모두 표시된 배아가 다음 이미지 시리즈에 표시됩니다. 제브라피쉬의 FSL 플루오레세인 라벨링이 표시됩니다. 이 첫 번째 이미지는 FSL 플루오레세인을 순환계에 직접 주입한 수정 후 52시간 제브라피쉬 유충의 미세 혈관 조영술입니다.

여기에서 제브라피시 혈관 구조의 염색을 관찰할 수 있습니다. FSL, 플루오레세인, 이질적인 제브라피시 신장 조직 세포 또는 ZK 세포를 외계에서 생성한 다음 수정 후 52시간 동안 제브라피시 세포의 순환계에 마이크로 주입 ZK 세포의 생체 내 관찰은 주사 후 2시간 후에 저속 관찰 방식으로 형광 하에서 혈관 구조를 이미징하여 이루어졌으며, 주황색 화살표와 빠르게 움직이는 세포로 표시된 크고 느리게 움직이거나 움직이지 않는 세포가 있는 단일 비디오 프레임입니다. 녹색 화살표로 표시된 움직임으로 인해 흐릿하게 보였습니다. 이 이미지에서는 최대 5일 동안 제브라피시 배아와 FSL 플루오레세인 함유 배지를 침지하여 얻은 구조체의 경구 흡수에 의한 FSL 플루오레세인 라벨링이 표시됩니다.

왼쪽의 FSL 플루오레세인 처리된 제브라피쉬의 명시야 현미경은 오른쪽의 인접한 형광 이미지와 일치합니다. 형광은 우선적으로 장관에 위치했습니다. 여기에 나타난 처리되지 않은 대조 배아에서는 염색이 관찰되지 않았습니다.

여기서 수포성 구내염 바이러스 또는 VSV는 섭씨 37도에서 2시간 동안 FSL 플루오레세인 밀리리터당 10마이크로그램으로 직접 라벨링한 후 4%파라폼 알데히드로 고정한 다음 사실 스캔에 의한 분석에서 VSV vir이 정제되지 않은 것으로 나타났습니다. FSL 후 라벨링이 필요했습니다. 이 히스토그램은 인간 A 푸에르토리코 8 19 34 또는 FSL 플루오레세인으로 표지된 H one N one VIRs에 감염된 돼지 고환 세포를 보여줍니다.

비형광이 발하는 감염되지 않은 세포는 검은색 선으로 표시되며, H one N one coron과 돼지 세포의 융합으로 인해 형광이 발생하는 경우 빨간색 선으로 표시됩니다. 이 다음 이미지 시리즈에서는 먼저 섭씨 37도에서 1시간 동안 FSL 비오틴으로 세포를 라벨링한 다음 세척하고 Fluor 4 표지된 아바돈으로 반응시킨 다음 형광 현미경 검사를 위해 세척 및 습식 장착했습니다. 첫 번째 이미지는 쥐 배아 아blasts assist의 컴파일된 컨포칼 이미지를 보여주며, 이 그림은 이전 이미지에서 배아의 중앙 컨포칼 슬라이스를 보여줍니다.

여기 살아있는 운동성 인간 perm zoa가 있습니다. 흐림은 움직임의 결과로 발생합니다. 삽입 후 4%파라폼 알데히드에 고정된 인간 정자의 보다 뚜렷한 대표 이미지는 여기 그림에서 볼 수 있습니다.

FSL 비오틴 표지된 인간 적혈구는 4% 파라폼 알데히드 프레스 삽입으로 고정되는 것으로 표시되며, 다음 두 그림과 같이 FSL 라벨링에 영향을 미치지 않으며, 4% 파라말 고정 RL 95 자궁내막 인간 암종 세포를 관찰할 수 있습니다. 반면 이 이미지에서는 RL 95 자궁내막 인간 암종 세포가 고정되어 있지 않습니다. 고정이 있거나 없는 두 이미지 간에 라벨링의 차이는 거의 관찰되지 않습니다.

세포의 정맥 주입 후 2시간 후에 채취한 혈액 샘플에서 관찰된 FSL 비오틴 표지 RBC 세포는 여기 왼쪽에 나타나 있고, 세포는 오른쪽의 광학 현미경으로 관찰되었으며, 동일한 세포 영역은 형광 아래에서 관찰되었으며, 존재하는 두 개의 세포는 녹색으로 식별될 수 있습니다. 표지되지 않은 세포에 대한 세포의 비율을 계산하는 것은 생존의 지표로 사용될 수 있습니다. 이 마지막 FSL 비오틴 표지 세포 이미지는 저감된 비드에 결합하여 시각화된 살아있는 인간 자궁내막 비오틴 세포를 보여줍니다.

이 마지막 이미지 시리즈는 FSL이 혈액형 마커와 상호 작용을 구성하는 것을 보여줍니다. 첫 번째 이미지는 인간 혈청의 희석액에 대해 테스트한 FSLG의 밀리리터당 500마이크로그램 농도로 코팅된 인간 적혈구 GLI 세포의 이미지입니다. 인간의 적혈구는 Xena 항원 GALI 항원과 자연적으로 반응하지 않습니다.

따라서 cyte는 혈청 내 항체 수준을 정량화하는 데 사용할 수 있습니다. 이 예시에서, 환자는 FSL 수치가 감소하는 cyte를 생성함으로써 antiga titer가 1에서 32 사이인 것으로 확인되었습니다. 항원 역가를 생성하는 것과 유사하게, 항체를 검출하기 위한 최적의 항원 수준을 결정할 수 있으며, 항체 수준이 특정 역가를 초과할 때만 양성 결과를 제공하도록 세포를 생성할 수 있습니다.

양성 결과를 제공하는 데 필요한 FSL 항원의 수준은 검출되는 항체의 품질과 수준에 따라 다릅니다. 일반적으로 탄수화물 항원의 경우 밀리리터당 100마이크로그램의 FSL 용액은 강력한 양성 반응을 일으킵니다. 인간 그룹 O 적혈구는 특정 수준의 항원 또는 소위 표준화 된 항원을 갖도록 변형되었습니다.

A cyte는 인간 혈청에서 antia를 정확하고 재현성 있게 정량화하는 데 사용됩니다. 이 예시에서, 세포는 기증자 자신의 적혈구에서 준비되었으며, 테스트된 O군 혈청의 항아 수치는 1에서 32로 밝혀졌습니다. 여기에서 볼 수 있듯이, 여섯 번째 관에서 단일 O군 적혈구 샘플에 동시에 삽입된 A형 및 B형 항원을 사용하여 주, B주 세포를 생성했습니다.

이러한 세포는 VO 품질 관리 목적으로 사용할 수 있습니다. 항아 및 항 B 시약에 대해 테스트된 특별히 공식화된 A Week, B Week Cyte의 분석은 튜브의 중간 하단 영역에서 발생하는 반응과 함께 이 그림에서 입증된 바와 같이 예상되는 약한 반응을 제공합니다. 이 간단한 기술은 제대로 수행되면 2 시간 안에 완료 할 수 있습니다.