果蝇卵母细胞的核迁移

这项技术使得使用活成像显微镜观察解剖的果蝇卵室（如卵母细胞核迁移）中的长生物过程成为可能。本协议描述了如何保持解剖的卵室存活12小时，以进行活体成像显微镜检查。首先，移液器200微升施耐德中等和补充30微升10毫克每毫升胰岛素，然后添加4微升的热灭活胎儿小腿血清。

使用移液器尖端在穿刺滑梯底部的孔周围涂抹少量硅胶润滑脂。放置盖唇，并使用移液器尖端的宽端对盖唇施加压力，使硅胶润滑脂平整，从而在滑梯上形成硅胶环内部。将麻醉雌蝇转移到含有150微升成像介质的解剖井。

对于解剖女性，使用钳子抓住胸腔，用第二对钳子捏住腹角质层。小心地切除子宫、卵石和肌肉护套。隔离并分离角质层开口时可见的卵巢对。

将10至15微升的成像介质滴放在卵巢上，并将一个卵巢转移到成像室。要分离卵巢，请使用针头固定卵巢的后端。用另一根针小心地拉起天体，把卵巢分开。

用一根针握住护套，用另一根针将卵石拉过较大的房间，以去除卵室上剩余的肌肉护套。让未护套的奥瓦里奥尔下沉并接触盖唇。使用钳子将卵巢的晚期和其余部分从微隔间中取出。

使用针头小心地拉近卵巢距离，以方便获取。将透膜的面积切成10到10毫米。小心地将膜涂在成像介质的顶部以排出任何气泡。

然后在膜轮廓上用一层薄薄的光环碳油密封腔室。将成像设置放在倒置显微镜的滑动支架上，并使用 40 倍目标。利用活成像显微镜捕捉到野生卵室卵母细胞核的迁移。

核到达前等离子膜或横向等离子膜，然后沿着轨迹滑动，到达两个等离子膜交汇处的最终位置。膜畸形、卵泡细胞杂乱无章、发育迟缓的细胞和收缩的细胞核是卵子室死亡的最初迹象。通常不会在成像前八小时检测到退化的卵母细胞。

然而，早期退化的罕见病例是由于解剖或安装步骤过程中的问题造成的。破坏卵室会损害它们的生存。因此，精密的手精确解剖和准备的微链是最重要的。

这个过程使我们能够想象卵母细胞核在迁移过程中可以采取三种不同的轨迹，不同的细胞在卵母细胞内调节这些轨迹。