Name: 마우스에서 1차 섬과 1차 췌장 아시나세포를 동시에 분리하는 간단하고 신속한 방법 (동영상) | JoVE Journal
Uploaded: 2026-01-09T13:30:00.000+00:00
Duration: 14 min 39 s
Description: 배우세요 마우스 췌장에서 1차 섬과 아시나세포를 동시에 분리하는 간단한 방법을. 콜라게나제 P 소화와 밀도 구배 원심분리를 사용하여 약 120개의 섬과 160만 개 이상의 세포를 얻습니다. 이 기법은 당뇨병 병인 연구에 유용합니다.

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<ol><li>Manrai, M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Diabetes+mellitus+as+a+consequence+of+acute+severe+pancreatitis%3A+unraveling+the+mystery%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Diabetes%22%5BJournal%5D)">Diabetes mellitus as a consequence of acute severe pancreatitis: unraveling the mystery.</a> World J Diabetes. 14 (8), 1212-1225 (2023).</li>
<li>García-Compeán, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Post-acute+pancreatitis+diabetes%3A+a+complication+waiting+for+more+recognition+and+understanding%5BTitle%5D)+AND+%22World+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Post-acute pancreatitis diabetes: a complication waiting for more recognition and understanding.</a> World J Gastroenterol. 29 (28), 4405-4415 (2023).</li>
<li>Shen, H. N., Yang, C. C., Chang, Y. H., Lu, C. L., Li, C. Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Risk+of+diabetes+mellitus+after+first-attack+acute+pancreatitis%3A+a+national+population-based+study%5BTitle%5D)+AND+%22Am+J+Gastroenterol%22%5BJournal%5D)">Risk of diabetes mellitus after first-attack acute pancreatitis: a national population-based study.</a> Am J Gastroenterol. 110 (12), 1698-1706 (2015).</li>
<li>Hohmeier, H. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Isolation+of+INS-1-derived+cell+lines+with+robust+ATP-sensitive+K%E2%81%BA+channel-dependent+and+-independent+glucose-stimulated+insulin+secretion%5BTitle%5D)+AND+%22Diabetes%22%5BJournal%5D)">Isolation of INS-1-derived cell lines with robust ATP-sensitive K⁺ channel-dependent and -independent glucose-stimulated insulin secretion.</a> Diabetes. 49 (3), 424-430 (2000).</li>
<li>Hohmeier, H. E., Newgard, C. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+lines+derived+from+pancreatic+islets%5BTitle%5D)+AND+%22Mol+Cell+Endocrinol%22%5BJournal%5D)">Cell lines derived from pancreatic islets.</a> Mol Cell Endocrinol. 228 (1-2), 121-128 (2004).</li>
<li>Neuman, J. C., Truchan, N. A., Joseph, J. W., Kimple, M. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+method+for+mouse+pancreatic+islet+isolation+and+intracellular+cAMP+determination%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A method for mouse pancreatic islet isolation and intracellular cAMP determination.</a> J Vis Exp. (88), e50374(2014).</li>
<li>Villarreal, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simple+high-efficiency+protocol+for+pancreatic+islet+isolation+from+mice%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">A simple high-efficiency protocol for pancreatic islet isolation from mice.</a> J Vis Exp. (150), e57048(2019).</li>
<li>Huang, C., Gu, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effective+isolation+of+functional+islets+from+neonatal+mouse+pancreas%5BTitle%5D)+AND+%22J+Vis+Exp%22%5BJournal%5D)">Effective isolation of functional islets from neonatal mouse pancreas.</a> J Vis Exp. (119), e55160(2017).</li>
<li>Petrov, M. S., Yadav, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+epidemiology+and+holistic+prevention+of+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Rev+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global epidemiology and holistic prevention of pancreatitis.</a> Nat Rev Gastroenterol Hepatol. 16 (3), 175-184 (2019).</li>
<li>Xiao, A. Y., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Global+incidence+and+mortality+of+pancreatic+diseases%3A+a+systematic+review%2C+meta-analysis%2C+and+meta-regression+of+population-based+cohort+studies%5BTitle%5D)+AND+%22Lancet+Gastroenterol+Hepatol%22%5BJournal%5D)">Global incidence and mortality of pancreatic diseases: a systematic review, meta-analysis, and meta-regression of population-based cohort studies.</a> Lancet Gastroenterol Hepatol. 1 (1), 45-55 (2016).</li>
<li>Sendler, M., Weiss, F. U., Golchert, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cathepsin+B-mediated+activation+of+trypsinogen+in+endocytosing+macrophages+increases+severity+of+pancreatitis+in+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Gastroenterology%22%5BJournal%5D)">Cathepsin B-mediated activation of trypsinogen in endocytosing macrophages increases severity of pancreatitis in mice.</a> Gastroenterology. 154 (3), 704-718.e10 (2018).</li>
<li>Modenbach, J. M., Möller, C., Asgarbeik, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Biochemical+analyses+of+cystatin-C+dimers+and+cathepsin-B+reveals+a+trypsin-driven+feedback+mechanism+in+acute+pancreatitis%5BTitle%5D)+AND+%22Nat+Commun%22%5BJournal%5D)">Biochemical analyses of cystatin-C dimers and cathepsin-B reveals a trypsin-driven feedback mechanism in acute pancreatitis.</a> Nat Commun. 16 (1), 1702(2025).</li>
</ol>

<table><tbody><tr><td>0.22 & mu; M 필터</td><td>밀렉스</td><td>SLGPR33RB</td><td>준비된 콜라겐제 P 용액을 여과합니다</td></tr><tr><td>0.25 M 염화칼슘 (무균)</td><td>비요타임</td><td>ST365</td><td>인슐린 분비를 활성화하는 칼슘 의존 신호 경로</td></tr><tr><td>1ml 주사기</td><td>지에루이</td><td>10084692516405</td><td>콜라겐제 P를 췌장 조직으로 관류시키는 데 사용됩니다.</td></tr><tr><td>1.25% 트리브로모에탄올 용액</td><td>베이징 요시다 생명공학 유한회사.</td><td>JT0781</td><td>마취</td></tr><tr><td>1.5 mL 원심분리관</td><td>에펜도르프</td><td>30121589</td><td>세포 상청액을 수집하여 원심분리 및 저장합니다.</td></tr><tr><td>1x 행크' S의 균형 잡힌 소금 용액</td><td>바이오샤프</td><td>BL561A</td><td>콜라겐제 P 용액을 준비하고 췌장 조직을 세척하세요</td></tr><tr><td>12웰 세포 배양 플레이트</td><td>사스테트</td><td>83.3921</td><td>췌장 조직과 배양에서 추출한 아시나를 보관하세요</td></tr><tr><td>15 mL 원심분리관</td><td>베이징 라브직 테크놀로지 유한회사.</td><td>CT-002-15A</td><td>실험 중 용액을 보관하기</td></tr><tr><td>24웰 세포 배양 플레이트</td><td>사스테트</td><td>83.3922</td><td>추출한 섬들을 양식하세요</td></tr><tr><td>40-mesh&nbsp; 체(체)</td><td>웨이단 인스트루먼트</td><td>해당 없음</td><td>췌장 조직 필터링</td></tr><tr><td>5 mL 파스퇴르 피펫</td><td>바이오샤프</td><td>BS-XG-03L</td><td>피펫 액체와 췌장 조직 물리적 교란</td></tr><tr><td>50 mL 원심분리기 튜브</td><td>베이징 라브직 테크놀로지 유한회사.</td><td>CT-002-50A</td><td>실험 중 용액을 보유하고, 조직을 담고, 원심분리하는 방법</td></tr><tr><td>60mm 세포 배양 접시</td><td>베이징 라브직 테크놀로지 유한회사.</td><td>12211</td><td>쉽게 따기 쉬운 아일렛을 담은 배양 배지를 담는 용기</td></tr><tr><td>75% 에탄올 용액</td><td>하이노트</td><td>해당 없음</td><td>쥐를 소독을 위해 불려 주세요.</td></tr><tr><td>어도비 포토샵 2023</td><td>어도비 주식회사</td><td>해당 없음</td><td>이미지를 생성하세요.</td></tr><tr><td>벡만 알레그라 X-12/X-12R 원심분리기</td><td>벡맨</td><td>알레그라 X-12/X-12R</td><td>원심분리기</td></tr><tr><td>소 혈청 알부민(BSA)-V</td><td>솔라비오</td><td>A8020</td><td>섬의 정상적인 생리적 기능을 유지하고, 다양한 농도의 포도당 용액을 준비하는 데 사용하세요.</td></tr><tr><td>C57BL/6J 마우스, SPF 등급, 6&ndash; 8주 된 상태, 몸무게는 18살 정도입니다; 25g</td><td>해군 의과대학 실험동물센터 &nbsp;</td><td></td><td></td></tr><tr><td>칼세인/PI 세포 생존 및 세포독성 분석 키트</td><td>비요타임</td><td>C2015L</td><td>칼세인-AM(칼세인 AM)과 프로피듐 요오다이드(PI) 이중 형광 염색을 통해 생존 가능한 세포와 죽은 세포를 동시에 검출하여 동물 세포의 세포 생존력과 세포독성을 검출합니다.</td></tr><tr><td>염화칼슘(무수)</td><td>상곤 바이오텍</td><td>10043-52-4</td><td>콜라겐제 P 용액을 준비하세요</td></tr><tr><td>셀 스트레이너 (100 & mu; m)</td><td>바이오샤프</td><td>BS-100-XBS</td><td>여과 액시나 세포</td></tr><tr><td>콜라게나제 P</td><td>시그마</td><td>11213857001</td><td>췌장 조직 소화</td></tr><tr><td>D-(+)-포도당 용액 (20%, 멸균)</td><td>비요타임</td><td>ST491</td><td>섬에서 인슐린 분비를 자극하세요.</td></tr><tr><td>DMEM 기본 (1회) (Dulbecco' s 변형된 이글 중간)</td><td>깁코</td><td>C11995500BT</td><td>세포 배양</td></tr><tr><td>태아 소 혈청(FBS)</td><td>바이오웨스트</td><td>S140B-500</td><td>배양지 준비</td></tr><tr><td>Ficoll-Paque PREMIUM 멸균 용액</td><td>시티바</td><td>17544203</td><td>밀도 구배 층화를 위한 밀도 구배 매질</td></tr><tr><td>그래프패드 프리즘 8.0.1</td><td>그래프패드 소프트웨어 LLC</td><td>해당 없음</td><td>이미지를 생성하고 통계 분석을 수행하세요.</td></tr><tr><td>HEPES 용액 (1 M)</td><td>바이오샤프</td><td>BL1061A</td><td>콜라겐제 P 용액을 준비하세요</td></tr><tr><td>고속/냉장 원심분리기</td><td>시그마</td><td>3K15</td><td>원심분리기</td></tr><tr><td>이미지J</td><td>국립보건원(NIH) 광학 및 계산 기기 연구소(LOCI)</td><td>해당 없음</td><td>세포 형광 영상을 분석하고 세포 생존력을 계산합니다.</td></tr><tr><td>역형 생물 현미경</td><td>라이카</td><td>해당 없음</td><td>세포 형태를 관찰하고 섬을 선택하세요.</td></tr><tr><td>역형광현미경</td><td>올림포스</td><td>IX73</td><td>세포 형광 신호를 관찰하고 형광 이미지를 포착하세요.</td></tr><tr><td>크렙스-링거 중탄산염 HEPES 완충기</td><td>리젠</td><td>CZ0103</td><td>섬의 정상적인 생리적 기능을 유지하고, 다양한 농도의 포도당 용액을 준비하는 데 사용하세요.</td></tr><tr><td>마우스 INS(인슐린) ELISA 키트</td><td>우한 파인 바이오테크 유한회사.</td><td>EM0260</td><td>섬의 인슐린 분비 수준을 감지하세요.</td></tr><tr><td>안과 겸자 (10cm, 굽이가 있는 곡선형)</td><td>칭이 의료기기</td><td>해당 없음</td><td>해부 보조</td></tr><tr><td>안과 겸자 (10cm, 치아가 있는 직선)</td><td>칭이 의료기기</td><td>해당 없음</td><td>췌장 조직의 해리 및 갑작스러운 분리 및 췌장 조직 추출을 지원합니다</td></tr><tr><td>페니실린 스트렙토마이신 용액</td><td>깁코</td><td>15140-122</td><td>오염을 방지하기 위해 배양지를 준비하세요</td></tr><tr><td>RPMI-1640 중형,</td><td>KeyGEN 바이오테크</td><td>KGL1501-500</td><td>콜라겐제 P소화액을 제거하고 섬을 배양하세요</td></tr><tr><td>Glycine max(대두)의 트립신 억제제입니다</td><td>시그마</td><td>T6522</td><td>콜라겐제 P 용액을 준비하세요</td></tr><tr><td>급박 가위 (10cm, 직선 뾰족)</td><td>칭이 의료기기</td><td>해당 없음</td><td>해부학 지원과 췌장 조직을 작은 조각으로 절단하는 데 도움이 됩니다</td></tr><tr><td>워터 배스</td><td>OAIICLAB</td><td>OW-HF</td><td>소화 온도를 유지하세요.</td></tr><tr><td>&알파-아밀라아제 및 &베타;-아밀라아제 활성 분석 키트</td><td>일러브사이언스</td><td>E-BC-K006-M</td><td>다양한 조건에서 아시나 세포가 분비하는 아밀라아제 수치를 검출합니다</td></tr></tbody></table>

마우스에서 1차 섬과 1차 췌장 아시나세포를 동시에 분리하는 간단하고 신속한 방법

A Simple and Rapid Method for Simultaneous Isolation of Primary Islets and Primary Pancreatic Acinar Cells from Mice

In the research on the pathogenesis of post-acute pancreatitis diabetes mellitus (PPDM-A), abnormal bidirectional communication between pancreatic acinar ...

a-simple-rapid-method-for-simultaneous-isolation-primary-islets

Research

연구

JoVE Journal

Medicine

의학

마우스 작은 섬 격리에 대한 자세한 설명은 collagenase와 중성 단백 분해 효소를 정제의 조합의 현장 췌장 ductal cannulation 및 재관류에의 기술을 사용하여 설명되어 있습니다.

Langerhans 절연의 마우스 작은 섬은 정화의 Collagenase와 중성 단백 분해 효소의 조합을 사용하여

이 비디오는 다양한 소화 효소를 포함하는 췌장 acinar 세포(외분비 세포)를 분리하는 데 사용되는 기술을 설명합니다. 1차 아시나르 세포는 췌장암 발병의 초기 사건인 아시나르-유관 화생(ADM)에 대한 생체 외 연구에 유용합니다.

Primary Acinar Cell Isolation: 마우스 췌장에서 Acinar 세포를 분리하는 방법

랑게르한스 섬이라고도 불리는 췌장 섬은 포도당 조절 및 기타 중요한 생물학적 기능을 위한 호르몬을 생산하는 내분비 세포의 클러스터입니다. 이 프로토콜은 먼저 Vater의 Ampulla를 통해 콜라겐 분해 효소를 관류하여 외분비 췌장 조직을 소화하고 단순화 된 밀도 구배 원심 분리를 통해 췌장 섬을 분리하는 방법을 설명합니다.

콜라겐분해효소 관류를 통한 췌장섬 분리: 췌장섬 세포를 분리하는 효소 방법

랑게르한스의 고립 된 마우스 독도를 이용하여 체외 β-세포 기능을 시금 당뇨병의 병태 생리 및 치료의 연구에 중요한 구성 요소입니다. 많은 다운 스트림 응용 프로그램을 사용할 수 있지만,이 프로토콜은 특히 β-세포의 기능을 결정하는 중요한 매개 변수로 세포 내 순환 아데노신 monophosphate (캠프)의 측정에 대해 설명합니다.

마우스 췌장 섬의 분리 및 세포 내 cAMP를 결정하는 방법

이 문서에서는, 우리는 분리와 생쥐 췌장에서 배양 기본 췌장 포상 세포에 대한 신속하고 편리하게 절차를 설명합니다. 이 방법은 신선한 차 변환되지 않은 정상 / 외분비 췌장 세포의 생리학을 연구하는 귀중한 방법을 구성합니다.

마우스 기본 췌장 포상 세포의 분리 및 문화

우리는 여기에서 제2형 당뇨병의 마우스 모델, Leprdb에서 섬을 분리하기 위한 프로토콜과 2개의 광자 현미경을 사용하는 온전한 섬에서 인슐린 분비를 측정하기 위한 라이브 셀 분석의 세부 정보를 제시합니다.

Lepr<sup&gt; DB</sup&gt; 2 형 당뇨병의 마우스 모델 : 본래 독도 췌장 섬 세포의 분리 및 라이브 셀 2 광자 이미징

우리는 신생아 쥐에서 그대로 섬을 분리 본원 프로토콜을 설명합니다. Pancreata 부분적으로 세척하고 손을 따기 다음, 콜라게나로 소화했다. 20-80 아일렛 클러스터 여러 섬 연구에 적합한 새로 태어난 쥐의 췌장에 따라 얻을 수있다.

신생아 마우스 췌장의 기능 독도의 효과적인 분리

이 섬 격리 프로토콜은 외분비 조직을 소화하기 위해 콜라게나아제 주사의 새로운 경로를 설명하고 마우스로부터 섬을 정화하기 위한 단순화된 그라데이션 절차를 설명했다. 효소 소화, 그라데이션 분리/정제, 그리고 아일렛 수작업 피킹이 포함됩니다. 성공적인 절연은 마우스당 250~350개의 고품질 및 완전한 기능을 갖춘 아일렛을 생성할 수 있습니다.

마우스에서 췌장 췌도 격리를 위한 간단한 고효율 프로토콜

여기 우리는 잠재적인 diabetogenic xenobiotic 화학 물질 식별는 xenobiotics에 의해 선생님 inductions을 심사에 대 한 마우스 췌 장 섬 세포 격리 프로토콜을 제시.

Diabetogenic 환경 화학 물질에 대 한 Murine 췌 장 섬 세포 기반 검사

여기에서, 우리는 췌도 세포와 같은 이기종 세포 집단에 있는 칼슘 역학을 화상 진찰 그리고 정량화하기 위한 프로토콜을 제시합니다. 형광 기자는 그 때 고정화되고 심상되는, 그리고 형광 강렬의 역학의 세포 당 분석이 수행되는 작은 틀 내의 세포의 말초 층으로 전달됩니다.

마우스 췌도 세포의 하위 집단에 있는 화상 진찰 칼슘 역학

이 프로토콜은 루이스 쥐 췌장 섬의 외과적 채취, 효소 소화 및 밀도-구배 정제를 표준화하는 방법을 설명하여, 이식 또는 시험관 내 연구에 직접 사용할 수 있는 고수율, 고순도 제제를 가능하게 합니다.

효소 소화 및 밀도-구배 분리를 이용한 루이스 쥐로부터의 췌장 섬 분리 및 정제

배우세요 마우스 췌장에서 1차 섬과 아시나세포를 동시에 분리하는 간단한 방법을. 콜라게나제 P 소화와 밀도 구배 원심분리를 사용하여 약 120개의 섬과 160만 개 이상의 세포를 얻습니다. 이 기법은 당뇨병 병인 연구에 유용합니다.

마우스에서 1차 섬과 1차 췌장 아시나세포를 동시에 분리하는 간단하고 신속한 방법

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