C. elegans (C. elegans) Rozwarstwienie blastomerów: metoda usuwania skorupki jaja i dysocjacji komórek embrionalnych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Biologia
0 wyświetleń • 3:41 min. • April 30th, 2023
- Do tej sekcji użyj dwóch mikropipet: jednej z otworem o szerokości mniej więcej tej samej szerokości co jajko i drugiej o dwukrotnie większej szerokości oraz szeregu roztworów zorganizowanych w studzienkach, aby ułatwić szybki transfer między nimi.
Po pierwsze, umieść dorosłe hermafrodyty w roztworze soli jaja, który jest osmotycznie zrównoważony, aby zapobiec pękaniu zarodków. Przetnij robaki na pół, aby uwolnić rozwijające się zarodki.
Następnie zidentyfikuj zarodki w stadium dwukomórkowym. Komórki te są blastomerami powstałymi w wyniku podziału zapłodnionej komórki jajowej. Użyj mikropipety z większym otworem, aby przenieść zarodek do roztworu podchlorynu, wybielacza, który zacznie rozkładać ochronną skorupkę jaja.
Już po 40 do 55 sekundach przenieś zarodek do pożywki wzrostu Sheltona lub SGM. Umyj krótko każdy zarodek w dwóch studzienkach SGM, aby usunąć wszelkie ślady wybielacza przed umieszczeniem go w trzecim dołku.
Teraz użyj mniejszej mikropipety, aby wielokrotnie pipetować zarodek, zapewniając siłę mechaniczną do usunięcia skorupki jaja i odsłonięcia blastomerów. Delikatnie kontynuuj pipetowanie zarodka, aby oddzielić poszczególne komórki blastomerów. W poniższym protok
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych