JoVE Encyclopedia of Experiments
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:27 min • October 30th, 2025
Zacznij od fluorescencyjnie znakowanej kultury bakteryjnej dodanej do buforu bezwęglowego.
Odwirować w celu osadzenia bakterii i wyrzucić supernatant.
Ponownie zawiesić granulat w świeżym, bezwęglowym buforze zawierającym łagodny detergent.
Brak źródła węgla hamuje wzrost, a detergent zapobiega zbrylaniu się i utrzymuje komórki w zawieszeniu.
Załadować zawiesinę bakteryjną do strzykawki i podłączyć ją do pompy.
Wstrzyknąć zawiesinę do wlotu chipa mikroprzepływowego zawierającego kanał z pułapkami osadzonymi w podłodze.
Powoli wyciągnij ciecz z wylotu kanału.
Gdy ciecz się cofa, siły kapilarne kierują bakterie w kierunku ujścia.
W tym procesie pojedyncze komórki bakteryjne osadzają się w pułapkach, powodując powstawanie wzorców bakteryjnych.
Ciągle przepłukuj kanał podgrzanym, bogatym w składniki odżywcze bulionem.
Bakterie wznawiają wzrost i tworzą mikrokolonie wewnątrz pułapek.
Użyj mikroskopii fluorescencyjnej, aby uchwycić obrazy poklatkowe i przeanalizować wzrost bakterii w kontrolowanym środowisku.
Odpipetować jeden mililitr pożywki MOPS do fiolki wirówkowej i dodać 10 mikrolitrów 0,132 molowego fosforanu potasu.
Podać 100 mikrolitrów nocnej kultury do fiolki wirówki i odwirować kulturę w temperaturze 2300 razy g przez dwie minuty. Delikatnie wyrzucić sklarat sklaratu, aby ponownie zawiesić osad w jednym mililitrze świeżej pożywki MOPS z 0,015% Tween 20 i 0,01% fosforanu potasu i załadować zawiesinę bakteryjną do jednomililitrowej strzykawki. Aby zabezpieczyć strzykawkę i połączenie rurki, należy bezpośrednio włożyć igłę do rurki.
Teraz zamontuj strzykawkę na pompie strzykawkowej i wstrzyknij zawiesinę do chipa mikroprzepływowego przez wlot znajdujący się w górnej części kanału, aż zawiesina pokryje obszar szablonu pułapkami. Ustaw pompę strzykawkową na natężenie przepływu od 0,07 do 0,2 mikrolitra na minutę, aby pobrać zawiesinę bakteryjną i monitorować proces tworzenia wzoru za pomocą oprogramowania mikroskopowego. Po ułożeniu matrycy z komórkami zwiększ natężenie przepływu pobierania, aby szybko opróżnić kanał mikroprzepływowy i przepłukać go świeżym LB, który został wcześniej odgazowany przez co najmniej 30 minut i wstępnie podgrzany w temperaturze 30 stopni Celsjusza.
Teraz ustaw pompę strzykawkową na natężenie przepływu dwóch mikrolitrów na minutę, aby delikatnie przepłukać kanał. Po napełnieniu kanału ponownie zwiększ natężenie przepływu. Uzyskuj obrazy rosnących bakterii w żądanym powiększeniu i odstępie czasu.
W niniejszym artykule opisano metodę wzorowania komórek bakteryjnych przy użyciu chipa mikroprzepływowego. Proces ten polega na wstrzyknięciu zawiesiny bakterii do kanału, w którym siły kapilarne kierują pojedyncze komórki do pułapek w celu obserwacji ich wzrostu.
Mikrofluidyczne wzorowanie i śledzenie wzrostu pojedynczych komórek bakteryjnych oparte na fluorescencji stanowią platformę o wysokiej rozdzielczości do badania zachowania drobnoustrojów w ściśle kontrolowanych warunkach. Podejście to umożliwia precyzyjną izolację pojedynczych komórek, co pozwala na rzetelną weryfikację hipotez oraz analizę ilościową, kluczową dla wczesnego odkrywania i walidacji celów w badaniach i rozwoju nad lekami przeciwinfekcyjnymi. Powtarzalność i skalowalność tej metody czynią ją użytecznym narzędziem do przesiewania całych portfolio oraz ograniczania ryzyka mechanistycznego.
Ten mikrofluidyczny i oparty na fluorescencji schemat postępowania integruje etapy wczesnego odkrywania, opracowywania testów oraz optymalizacji modeli przedklinicznych.
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Powiązane filmy
0 Wyświetlenia
Ostatnia aktualizacja: 22 sierpnia 2026