Wzorce mikroprzepływowe i śledzenie wzrostu bakterii jednokomórkowych na podstawie fluorescencji

Zacznij od fluorescencyjnie znakowanej kultury bakteryjnej dodanej do buforu bezwęglowego.

Odwirować w celu osadzenia bakterii i wyrzucić supernatant.

Ponownie zawiesić granulat w świeżym, bezwęglowym buforze zawierającym łagodny detergent.

Brak źródła węgla hamuje wzrost, a detergent zapobiega zbrylaniu się i utrzymuje komórki w zawieszeniu.

Załadować zawiesinę bakteryjną do strzykawki i podłączyć ją do pompy.

Wstrzyknąć zawiesinę do wlotu chipa mikroprzepływowego zawierającego kanał z pułapkami osadzonymi w podłodze.

Powoli wyciągnij ciecz z wylotu kanału.

Gdy ciecz się cofa, siły kapilarne kierują bakterie w kierunku ujścia.

W tym procesie pojedyncze komórki bakteryjne osadzają się w pułapkach, powodując powstawanie wzorców bakteryjnych.

Ciągle przepłukuj kanał podgrzanym, bogatym w składniki odżywcze bulionem.

Bakterie wznawiają wzrost i tworzą mikrokolonie wewnątrz pułapek.

Użyj mikroskopii fluorescencyjnej, aby uchwycić obrazy poklatkowe i przeanalizować wzrost bakterii w kontrolowanym środowisku.

Odpipetować jeden mililitr pożywki MOPS do fiolki wirówkowej i dodać 10 mikrolitrów 0,132 molowego fosforanu potasu.

Podać 100 mikrolitrów nocnej kultury do fiolki wirówki i odwirować kulturę w