Obrazowanie zmian morfologicznych u bakterii za pomocą mikroskopii fluorescencyjnej żywych komórek
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Mikrobiologia
0 wyświetleń • 3:15 min. • March 31st, 2026
Zacznij od posiewy bakteryjnej unieruchomionej pod agarozową płytą w misce ze szklanym dnem.
Błony bakteryjne są oznakowane barwnikami fluorescencyjnymi.
Bakterie są również zaprojektowane tak, aby wyrażać antysensowne RNA, które celuje w konkretne mRNA, hamując produkcję istotnego białka podziału komórkowego.
Dodaj kroplę oleju immersyjnego do obiektywu odwróconego mikroskopu fluorescencyjnego.
Włóż talerz do metalowej obudowy i zabezpiecz ją na scenie mikroskopu.
Podnieś obiektyw do momentu, gdy olej dotknie się naczynia, potem skup się na komórkach.
Użyj oprogramowania do obrazowania, aby ustawić stosy Z, aby przechwytywać obrazy na różnych głębokościach.
Zacznij robić zdjęcia poklatkowe fluorescencyjne.
W miarę jak komórki reagują na ekspresję antysensowego RNA, nie dzielą się i rozwijają opuchnięte kształty.
Organizacja błony ulega zaburzeniom, co prowadzi do nierównomiernej i ogniskowej fluorescencji, co wskazuje na wadliwy podział komórkowy.
Aby obrazować próbkę, użyj pokrętła ostrości do regulacji grubej, aby upewnić się, że obiektyw jest całkowicie opuszczony przed zainicjowaniem mikroskopu w oprogramowaniu mikroskopu. Włóż kroplę oleju o współczynniku załamania 1,517 do obiektywu z
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych