Pobieranie próbek pojedynczych komórek za pomocą mikrodysekcji laserowej: technika zbierania komórek docelowych z heterogenicznej populacji komórek
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Badania nad rakiem
0 wyświetleń • 2:30 min. • April 30th, 2023
Mikrodysekcja wychwytu laserowego pomaga uzyskać pojedynczą komórkę docelową z mieszaniny komórek przygotowanej na szkiełku podstawowym. Zacznij od pobrania na jego powierzchni odpowiedniego szkiełka podstawowego pokrytego przepuszczalną dla promieniowania UV, biochemicznie obojętną membraną. Wystaw szkiełko na działanie światła UV, aby uczynić je bardziej hydrofilowym i lepiej przylegać do komórek.
Zamontować szkiełko w aparacie do cytowirówki. Dodać zawiesinę komórek do portu lejkowego aparatu. Cytowirówka, aby umożliwić skoncentrowanie siły odśrodkowej i osadzenie monowarstwy komórek na małym obszarze na szkiełku podstawowym. Pozostaw szkiełko do wyschnięcia na powietrzu.
Umieść szkiełko próbką do góry pod mikroskopem laserowym do mikroskopu preparacyjnego. Zdefiniuj region otaczający komórkę zainteresowania. Teraz skoncentruj wiązkę laserową, aby przeciąć obszar zawierający komórkę docelową wraz z powłoką membrany. Następnie rozogniskuj wiązkę laserową i pulsuj ją, aby wytworzyć ciśnienie. Energia ta katapultuje mikrowypreparowany obszar do odwróconej nasadki wstępnie zmontowanej rurki zbiorczej zawierającej bufor umieszczony nad szkiełkiem.
Wyjmij rurkę i zamknij jej nakrętkę.
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych