Barwienie kwasem okresowym Schiffa lub PAS: metoda oceny deformacji strukturalnych kłębuszków nerkowych

Kłębuszek nerkowy to złożona sieć naczyń włosowatych w nerkach, która filtruje odpady i usuwa nadmiar płynu z krwi. Szybkość filtracji nerkowej zależy od tej wyspecjalizowanej struktury, którą można zbadać za pomocą barwnika Periodic Acid Schiff lub PAS.

Na początek weź parafinowany wycinek kory nerki na szklanym szkiełku. Potraktuj szkiełko ksylenem. Cząsteczki ksylenu rozpuszczają wosk parafinowy z części tkankowej. Następnie wystaw próbkę na działanie zmniejszających się stężeń alkoholu. Alkohol usuwa ślady ksylenu, jednocześnie nawilżając część tkanki w celu późniejszego związania plamy.

Teraz dodaj kwas periodyczny do próbki. Kwas periodyczny przekształca diole obecne w polisacharydach tkankowych, takich jak glikogen lub mucyna, w aldehydy. Aldehydy te reagują z odczynnikiem Schiffa, kombinacją kwasu fuksynowego i siarkowego, tworząc barwnik w kolorze magenty, który barwi wycinek tkanki. Opłucz szkiełko, aby usunąć nadmiar plamy.

Po spłukaniu dodaj żelazo-hematoksylinę, jądrowy barwnik przeciwzapalny, który wiąże się z DNA i barwi go na fioletowo. Umyj, aby usunąć nadmiar plam. Na koniec odwodnić próbkę za pomocą zwiększającej mocy alkoholu, a następnie ksylenu, który służy jako środek czyszczący. Ten krok pomaga poprawić kontrast przekroju tkanki do badania mikroskopowego.

Chorobę kłębuszków nerkowych można uwidocznić jako pogrubienie błony podstawnej, zmienione naczynia włosowate i nieprawidłowe komórki, które odnoszą się do upośledzenia funkcji nerek.

Aby uzyskać szczegółową wizualizację komórek kłębuszków nerkowych i macierzy mezangialnej, należy wysuszyć próbki kory nerkowej osadzonej w parafinie w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 1 godzinę, a następnie przeprowadzić deparafinowanie za pomocą kolejnych zanurzeń w ksylenie i zstępującym etanolu. Ponownie uwodnić próbki w wodzie destylowanej przez 5 minut i inkubować szkiełka w roztworze kwasu okresowego w komorze wyciągowej.

Po 5 minutach przepłukać szkiełka trzema 5-minutowymi płukaniami w 100 mililitrach wody destylowanej, a następnie 15-minutową inkubacją w odczynniku Schiffa. Pod koniec inkubacji umyć szkiełka pod bieżącą wodą z kranu przez 5 minut i przeciwbarwić hematoksyliną przez 3 sekundy, a następnie dokładnie spłukać pod bieżącą wodą z kranu przez kolejne 15 minut.

Następnie odwodnij szkiełka za pomocą wznoszących się zanurzeń w etanolu i dwóch kolejnych 3-minutowych zanurzeń w ksylenie. Po wyschnięciu na powietrzu szkiełka można zamontować za pomocą podłoża montażowego na bazie ksylenu w celu oceny ich struktury kłębuszkowej pod mikroskopem świetlnym przy 400-krotnym powiększeniu.

• Periodic Acid Schiff Stain - Method used to visualize glomerular cells and the mesangial matrix.
• PAS Stain Glomerulus - Specific application of PAS stain in kidney cortex study.
• Acid Schiff Staining - Another name for the PAS staining process.
• Periodic Acid Structure - Part of PAS stain, involved in revealing cellular structure in staining.
• Glomerular Tuft - Structure in kidney cortex, analyzed using PAS stain.

• Periodic Acid Schiff Stain - Define and contextualize (e.g., periodic acid schiff stain).
• Key Concepts - Summarize principles (e.g., staining theory).
• Underlying Mechanisms - Short description of PAS staining process.
• Connect to Experiment - Brief rationale linking periodic acid and schiff reagent to kidney cortex sample study.

• What is the Periodic Acid Schiff Stain method and how it contributes to kidney cortex research?
• How does the PAS staining process work?
• What is the role of the Glomerular Tuft in PAS staining?

• Describe Practical Applications - PAS stain used for analyzing kidney structures (e.g., medical diagnosis).
• Industry Impact - Benefits healthcare, particularly nephrology.
• Societal Importance - Enables better understanding of kidney diseases (e.g., education).
• Link to Scientific Advancements - Short description of innovations in staining techniques.