JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Techniki biologiczne
0 wyświetleń • 7:50 min. • July 8th, 2025
Technika cyfrowego PCR oparta na chipie polega na podziale pojedynczej reakcji na komory nanofluidycznego chipa. Amplifikacja podzielonych sekwencji umożliwia wykrywanie rzadkich wariantów transkryptów — niekanonicznych transkryptów występujących z niską częstotliwością.
Na początek weź próbkę zawierającą cDNA docelowego rzadkiego wariantu transkryptu i wariantu powszechnego. Dodaj roztwór zawierający termostabilną polimerazę DNA, dNTP i startery.
Dodaj powszechne i rzadkie sondy oligonukleotydowe specyficzne dla wariantu transkryptu — znakowane różnymi reporterami fluorescencyjnymi i cząsteczkami wygaszającymi. Wygaszacz absorbuje fluorescencję reportera, gdy znajduje się w bliskiej odległości.
Załaduj mieszaninę na chip nanofluidyczny. Roztwór jest podzielony na nanokomory o jednakowej wielkości. Każda komora zawierająca cDNA służy jako niezależne naczynie reakcyjne.
Rozpocznij proces cykli termicznych. Wysoka temperatura denaturacji rozdziela dwuniciowe DNA na pojedyncze nici. Obniż temperaturę, pozwalając starterom i sondom oligonukleotydowym na wyżarzanie się do komplementarnych regionów na pojedynczych niciach DNA.
Zwiększ temperaturę, aby osiągnąć etap przedłużania, w którym
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych