Sortowanie komórek oparte na cytometrii przepływowej dla różnych populacji krążących komórek B

0 views • 3:01 min • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Na podstawie receptorów powierzchniowych komórek, ludzkie krążące limfocyty B są klasyfikowane jako naiwne komórki B CD19-dodatnie, komórki B pamięci CD19 i CD27-dodatnie oraz komórki plazmatowe plazmablastów CD19, CD27 i CD38-dodatnie.

Aby posortować te populacje komórek, weź oczyszczoną zawiesinę limfocytów B. Inkubować z ludzkimi przeciwciałami immunoglobuliny G. Przeciwciała blokują receptory Fc limfocytów B, zapobiegając wiązaniu przeciwciał nieswoistych.

Dodaj znakowane fluorescencyjnie przeciwciała skierowane przeciwko CD19, CD27 i CD38.

Przeciwciała anty-CD19 wiążą się z receptorami CD19 powszechnie ulegającymi ekspresji na komórkach B.

Przeciwciała anty-CD27 wiążą się z receptorami CD27 ulegającymi ekspresji na komórkach B pamięci i komórkach plazmatycznych plazmablastów.

Przeciwciała anty-CD38 wiążą się z receptorami CD38 ulegającymi ekspresji na komórkach plazmablastowych.

Dodaj fluorescencyjny barwnik wiążący DNA jako marker martwych komórek.

Martwe komórki wykazują utratę integralności błony, co pozwala na wejście barwnika do komórki i wiązanie się z dwuniciowym DNA; żywe komórki pozostają niezabarwione.

Odwirować w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał i barwników oraz ponownie zawiesić komórki w buforze FACS. Przefiltruj komórki przez sitko, aby uzyskać jednorodną zawiesinę i wyeliminować grudki.

Za pomocą cytometru przepływowego posortuj martwe komórki od żywych. W żywych komórkach ekspresja CD19, CD27 i CD38 odróżnia naiwne komórki B, komórki B pamięci i komórki plazmatyczne plazmablastów.

Po wykonaniu nieswoistego blokowania, dodać 1 mikrogram każdego przeciwciała selekcyjnego na 1 x 106 komórek do probówki, delikatnie mieszając przez 30-minutową inkubację na lodzie. W ciągu ostatnich pięciu minut inkubacji dodaj do komórek 5 mikrolitrów 7-AAD. Następnie dodaj 2 mililitry świeżego PBS do komórek i zwiruj przed odwirowaniem.

Ponownie zawiesić granulat w świeżym buforze do sortowania w stężeniu 1 do 5 x 107 komórek na mililitr i przefiltrować komórki przez sitko do komórek o średnicy 40 mikronów do nowej 5-mililitrowej rurki polistyrenowej. Następnie posortuj komórki za pomocą cytometrii przepływowej do trzech 15-mililitrowych probówek zawierających 5 mililitrów świeżego podłoża RPMI, aby zebrać naiwne komórki B, komórki B pamięci i komórki plazmatyczne plazmablastów.

11:06

Analiza całego genomu modulacji mikroRNA i mRNA za pośrednictwem inhibitora HDAC w komórkach B indukowanych do rekombinacji DNA ze zmianą klasy i różnicowania komórek plazmatycznych

Related Videos

0 Views

08:25

Odkrywanie kluczowych graczy odporności humoralnej: zaawansowany i zoptymalizowany protokół izolacji limfocytów z plastrów mysich Peyera

Related Videos

0 Views

08:25

Charakterystyka cytometrii przepływowej rozwoju mysich komórek B

Related Videos

0 Views

15:29

Oczyszczanie określonej populacji komórek za pomocą sortowania komórek aktywowanych fluorescencją (FACS)

Related Videos

0 Views

09:53

Zautomatyzowany protokół mikroprzepływowej lizy krwi w celu wzbogacenia krążących komórek jądrzastych

Related Videos

0 Views

04:57

Test cytometrii przepływowej w celu identyfikacji podzbiorów komórek odpornościowych w komórkach jednojądrzastych krwi obwodowej

Related Videos

0 Views

08:01

Sortowanie komórek aktywowane fluorescencją w celu oczyszczenia plazmocytoidalnych komórek dendrytycznych ze szpiku kostnego myszy

Related Videos

0 Views

11:08

Analiza zawiesin komórkowych wyizolowanych z tkanek stałych za pomocą spektralnej cytometrii przepływowej

Related Videos

0 Views

09:34

Kombinatoryczne podejście jednokomórkowe w celu scharakteryzowania molekularnej i immunofenotypowej heterogeniczności populacji ludzkich komórek macierzystych i progenitorowych

Related Videos

0 Views

14:30

Immunofenotypowanie i sortowanie komórek ludzkich MK ze źródeł pierwotnych u ludzi lub zróżnicowanych in vitro z progenitorów hematopoetycznych

Related Videos

0 Views

Last updated: 4 July 2026