Sortowanie komórek oparte na cytometrii przepływowej dla różnych populacji krążących komórek B
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:01 min. • July 8th, 2025
Na podstawie receptorów powierzchniowych komórek, ludzkie krążące limfocyty B są klasyfikowane jako naiwne komórki B CD19-dodatnie, komórki B pamięci CD19 i CD27-dodatnie oraz komórki plazmatowe plazmablastów CD19, CD27 i CD38-dodatnie.
Aby posortować te populacje komórek, weź oczyszczoną zawiesinę limfocytów B. Inkubować z ludzkimi przeciwciałami immunoglobuliny G. Przeciwciała blokują receptory Fc limfocytów B, zapobiegając wiązaniu przeciwciał nieswoistych.
Dodaj znakowane fluorescencyjnie przeciwciała skierowane przeciwko CD19, CD27 i CD38.
Przeciwciała anty-CD19 wiążą się z receptorami CD19 powszechnie ulegającymi ekspresji na komórkach B.
Przeciwciała anty-CD27 wiążą się z receptorami CD27 ulegającymi ekspresji na komórkach B pamięci i komórkach plazmatycznych plazmablastów.
Przeciwciała anty-CD38 wiążą się z receptorami CD38 ulegającymi ekspresji na komórkach plazmablastowych.
Dodaj fluorescencyjny barwnik wiążący DNA jako marker martwych komórek.
Martwe komórki wykazują utratę integralności błony, co pozwala na wejście barwnika do komórki i wiązanie się z dwuniciowym DNA; żywe komórki pozostają niezabarwione.
Odwirować w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał i barwników
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych