Wizualizacja powstawania i zamykania fagosomów oparta na mikroskopii TIRF
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:13 min. • July 8th, 2025
Weź szklane naczynie z dnem pokrytym polimerem, zawierające IgG-opsonizowane czerwone krwinki lub erytrocyty przyklejone do jego powierzchni.
Umieść naczynie na stoliku mikroskopu fluorescencyjnego z całkowitym wewnętrznym odbiciem, utrzymując go w temperaturze fizjologicznej.
Dodaj makrofagi zawierające znakowane fluorescencyjnie peptydy cytoplazmatyczne, które wiążą się ze spolimeryzowaną aktyną, ułatwiając wizualizację cytoszkieletu.
Podczas obrazowania skieruj wiązkę laserową pod kątem wyższym niż kąt krytyczny, powodując wewnętrzne odbicie i generowanie fal ulotnych w punkcie kontaktu.
Ulotne fale selektywnie oświetlają fluorofory na granicy faz szkło-próbka, umożliwiając wizualizację fagocytozy w czasie rzeczywistym.
Receptory Fc makrofagów wiążą się z opsonizowanymi IgG krwinkami czerwonymi, powodując grupowanie receptorów wokół obszaru kontaktu.
Grupowanie wyzwala wewnątrzkomórkowe szlaki sygnałowe i aktywację GTPazy, napędzając polimeryzację aktyny i rekrutację dynaminy, tworząc pseudopody.
Pseudopody rozciągają się wokół RBC, tworząc miseczkę fagocytarną.
W końcu końcówki pseudopodów łączą się. Nagromadzona dynamina pośredniczy w oddzieleniu fagosomu od błony komórkowej,
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych