JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:04 min. • July 8th, 2025
Zacznij od umycia nieruchomego odcinka serca w buforze kakodylanu sodu, który stabilizuje strukturę tkanki. Zanurz sekcję w czterotlenku osmu, aby wybarwić lipidy błony.
Potraktuj octanem sodu, aby utrzymać optymalne pH do barwienia.
Dodaj octan uranylu, aby wybarwić biomolekuły, zapewniając lepszy kontrast podczas mikroskopii.
Odwodnić tkankę w rosnących stężeniach etanolu, a następnie acetonu.
Zanurz tkankę w żywicy, uzyskaj ultracienkie skrawki i przenieś je na siatkę mikroskopową.
Wprowadź metaperiodynian sodu, aby usunąć tetratlenek osmu, demaskując białko komórkowe.
Związek utlenia również glikoproteinę, tworząc reaktywne grupy aldehydowe, które są neutralizowane przez obróbkę glicyną.
Wprowadzić bufor blokujący, zapobiegający niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Dodać przeciwciała pierwszorzędowe specyficzne dla białka docelowego, a następnie biotynylowane przeciwciała drugorzędowe.
Dodaj kropki kwantowe sprzężone ze streptawidyną, które wiążą się z biotyną.
Pod mikroskopem elektronowym obszary znakowane kropkami kwantowymi wykazują wyższy kontrast, co pomaga w precyzyjnej lokalizacji subkomórkowej docelowego białka.
Po 24 godzinach od utrwalenia przemyć tkankę w 0,1-molow
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych