JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 5:21 min. • July 8th, 2025
Weźmy szkiełko z mikromacierzy zawierające peptydy histonowe z docelowymi i niedocelowymi modyfikacjami potranslacyjnymi lub PTM.
Peptydy są unieruchamiane za pomocą sprzężonej biotyny w określonych miejscach na szkiełku podstawowym funkcjonalizowanym streptawidyną.
Plamki zawierają również unieruchomiony zielony fluorofor sprzężony z biotyną, ułatwiający identyfikację plamek.
Wprowadzić bufor blokujący, zapobiegający niespecyficznym interakcjom przeciwciał.
Usunąć bufor i odwirować w celu wysuszenia szkiełka.
Wewnątrz drukarki woskowej obramuj tablicę woskiem.
Zrównoważ tablicę za pomocą bufora hybrydyzacji.
Inkubować z pierwszorzędowymi przeciwciałami specyficznymi dla docelowego PTM.
Wprowadź przeciwciała drugorzędowe sprzężone z czerwonym fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Usunąć niezwiązane przeciwciała i odwirować w celu wysuszenia szkiełka.
Zobrazuj slajd za pomocą skanera z mikromacierzą. Zielona fluorescencja pomaga zidentyfikować plamki, podczas gdy czerwona fluorescencja wskazuje na interakcję PTM-przeciwciało, wykazując swoistość przeciwciał.
Rozpoznanie docelowego PTM wykazuje swoistość przeciwciał, podczas gdy rozpoznanie niedocelowych PT
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych