Oparta na cytometrii przepływowej analiza aktywacji komórek dendrytycznych przy użyciu kompleksów immunologicznych
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 3:35 min. • July 8th, 2025
Zacznij od chemicznie utrwalonej zawiesiny komórek nowotworowych.
Dodaj optymalne stężenie immunoglobuliny G wiążącej nowotwór, która wiąże się z antygenami powierzchniowymi komórek nowotworowych, tworząc kompleksy immunologiczne lub IC.
Przenieść IC na płytkę hodowlaną zawierającą przylegające komórki dendrytyczne. Inkubować.
Komórka dendrytyczna rozpoznaje układ scalony, internalizuje go i przetwarza na fragmenty peptydowe.
Fragmenty są ładowane na cząsteczki głównego kompleksu zgodności tkankowej klasy II lub MHC-II i prezentowane na powierzchni komórki wraz z cząsteczką kostymulującą CD86.
Usuń nośnik. Dodaj bufor dysocjacyjny komórek i energicznie pipetuj, aby odłączyć komórki.
Przenieś komórki do probówki.
Odwirować i ponownie zawiesić komórki w roztworze blokującym, aby zablokować niespecyficzne interakcje.
Nakładka z koktajlem przeciwciał znakowanych fluoroforem ukierunkowanym na MHC-II i CD86.
Dodaj barwnik wiążący DNA i krótko inkubuj, aby wybarwić martwe jądra komórkowe.
Za pomocą cytometrii przepływowej zidentyfikuj żywe komórki wykazujące współekspresję MHC-II i CD86, potwierdzając aktywację komórek dendrytycznych za pośrednictwem IC.
Najpierw utrwal komórki w 1,8% buf
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych