Wykrywanie nieprawidłowych białek prionowych w tkance mózgowej za pomocą immunohistochemii
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Immunologia
0 wyświetleń • 4:37 min. • July 8th, 2025
Weźmy slajd z nieruchomą sekcją mózgu ssaków wykazującą nieprawidłowo sfałdowane agregaty białka prionowego.
Potraktuj przekrój kwasem mrówkowym, aby zmniejszyć zakaźność agregatów prionowych.
Potraktuj kwaśnym buforem w uwodnionej komorze ciśnieniowej. Wysoka temperatura i kwaśne pH przerywają wiązania krzyżowe białek wywołane wiązaniem, demaskując epitopy antygenowe.
Zanurz w wodzie utlenionej, aby dezaktywować endogenną peroksydazę, zapobiegając niepożądanemu barwieniu tła.
Umieść szkiełko w pokrywie i dodaj bufor, aby utrzymać nawodnienie tkanek.
Wprowadzić roztwór blokujący, zapobiegający niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Dodać pierwszorzędowe przeciwciało specyficzne dla agregatów prionowych.
Usuń niezwiązane cząsteczki przeciwciała. Wprowadzić biotynylowane przeciwciało drugorzędowe, które wiąże się z przeciwciałem pierwszorzędowym.
Usuń niezwiązane cząsteczki przeciwciała. Dodaj biotynylowany enzym peroksydazy skompleksowany z awidyną, który wiąże się z biotyną na przeciwciałie drugorzędowym.
Dodaj podłoże chromogenne, które peroksydaza utlenia się do kolorowego produktu.
Za pomocą mikroskopu obserwuj poplamione agregaty.
Ostrożnie zanurz skrawki tkanki w 98% kwasie mr
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych