Multipleksowa metoda barwienia immunologicznego przy użyciu pierwszorzędowych przeciwciał od tego samego gatunku gospodarza

Weź stały i przepuszczalny odcinek nadnercza składający się z kory i rdzenia. Potraktuj go wrzącym kwaśnym buforem, zrywając wiązania krzyżowe wywołane fiksacją w celu zdemaskowania antygenu.

Zablokuj niespecyficzne miejsca wiązania i wprowadź pierwszorzędowe przeciwciała wiążące się z markerami specyficznymi dla kory mózgowej.

Dodać biotynylowane przeciwciała drugorzędowe skierowane przeciwko przeciwciałom pierwszorzędowym i peroksydazy sprzężonej ze streptawidyną wiążące się z biotyną.

Wprowadzić znakowany fluoroforem tyramid i nadtlenek wodoru.

Unieruchomione peroksydazy wykorzystują nadtlenek wodoru do aktywacji tyramidu, który wiąże się z pobliskimi białkami, znakując korę.

Następnie potraktuj sekcję wrzącym buforem, aby usunąć związane przeciwciała.

Wprowadź te same przeciwciała pierwszorzędowe wytwarzane przez gatunki gospodarza ukierunkowane na markery specyficzne dla rdzenia i biotynylowane przeciwciała drugorzędowe.

Wprowadzić peroksydazy sprzężone ze streptawidyną i inny tyramid sprzężony z fluoroforem, aby oznaczyć rdzeń.

Usunięcie przeciwciał pierwszorzędowych specyficznych dla kory mózgowej hamuje wiązanie ich ponownie wprowadzonych przeciwciał drugorzędowych, zapobie