Uzyskiwanie poziomych wycinków mózgu hipokampa myszy

Weźmy półkule mózgowe myszy w roztworze o wysokiej zawartości sacharozy. Zabezpiecz półkule brzuszną stroną skierowaną do góry na płytce próbki wibratomu za pomocą kleju.

Przenieść płytkę z próbką do komory krojenia.

Dodaj częściowo zamrożony roztwór o wysokiej zawartości sacharozy, aby utrzymać warunki fizjologiczne tkanki i zestalić klej.

Dostarcz mieszaninę dwutlenku węgla i tlenu, aby utrzymać dotlenienie tkanek.

Korzystając z ustawionych parametrów, uzyskaj początkowe plasterki i usuń je. Ponadto uzyskaj poziome plasterki hipokampa.

Ostrożnie przenieś te wycinki mózgu do komory zawierającej ACSF w celu regeneracji tkanek.

Poziome plastry hipokampa są gotowe do dalszych eksperymentów.

Umieść obie półkule na świeżo przyciętej stronie grzbietowej z brzuszną częścią mózgu skierowaną do góry i umieść kroplę superglue na płytce próbki. Użyj końcówki pipety, aby rozprowadzić klej na dużym obszarze, aby pomieścić oba kawałki tkanki, i dotknij kawałka paska bibuły filtracyjnej po brzusznej stronie jednej półkuli. Użyj innego paska z bibuły filtracyjnej, aby ostrożnie częściowo wysuszyć grzbietową stronę mózgu i umieść półkulę grzbietową w dół na kleju na płytce próbki.

Użyj dwóch dodatkowych pasków z bibuły filtracyjnej, aby ustawić drugą półkulę na kleju, jak pokazano, i umieść płytkę próbki w komorze krojenia. Następnie, szybko, ale ostrożnie, przykryj talerz lodowatym roztworem plastrów o wysokiej zawartości sacharozy. Aby uzyskać skrawki tkanki mózgowej, umieść ostrze wibratomu przed przyśrodkową stroną półkul i podnieś stół wibratomu tak, aby ostrze znajdowało się na tej samej wysokości, co brzuszne strony półkul, które są teraz skierowane do góry.

Użyj regulatora wibratomu, aby opuścić ostrze o 600 mikronów dalej w kierunku grzbietowym i pokrój tkankę, aż pierwsze dwa plastry zostaną całkowicie oddzielone od dwóch półkul. Po uzyskaniu pierwszych dwóch plasterków tkanki odwróć kierunek cięcia i opuść ostrze o kolejne 300 mikronów przed ponownym krojeniem. Kiedy hipokamp stanie się widoczny, użyj poszerzonej plastikowej pipety Pasteura, aby zebrać i przenieść plastry do komory regeneracyjnej w łaźni wodnej.