Generowanie koronalnego wycinka mózgu odsłaniającego obszary ciała migdałowatego z mózgu myszy

Weź mózg myszy w lodowatym buforze i usuń jego tylną część zawierającą móżdżek i przednią część z przyśrodkową korą przedczołową lub mPFC.

Środkowa część zawiera obszary ciała migdałowatego, które przetwarzają emocje, takie jak strach i niepokój.

Przesuń część mózgu na bibułę filtracyjną, aby usunąć nadmiar buforu.

Przyklej go do stolika i przymocuj blok agaru za sekcją, aby zapobiec jego ruchowi podczas krojenia.

Umieść ten etap w komorze cięcia wibratomu z lodowatym buforem.

Wytnij sekcję, aby uzyskać cienki koronalny wycinek mózgu.

Odsłania to obszary ciała migdałowatego, które zawierają połączenia synaptyczne między neuronami ciała migdałowatego i projekcjami neuronów mPFC, które regulują odpowiedzi ciała migdałowatego.

Pokrój plasterek na dwie połówki, z których każda zawiera obszar ciała migdałowatego.

Następnie przenieś je do komory interfejsu zawierającej natleniony sztuczny płyn mózgowo-rdzeniowy.

Odzyskaj plastry w temperaturze fizjologicznej, aby utrzymać żywotność neuronów.

Po uzyskaniu mózgu użyj skalpela, aby usunąć móżdżek i wewnętrzną część mózgu, a następnie schłodzić środkową część mózgu w lodowatym roztworze tnącym, tak jak poprzednio. Osusz mózg bibułą filtracyjną, a następnie przyklej go do etapu wibratomu.

Ponownie przymocuj dodatkowy blok agaru za mózgiem, aby zapewnić stabilność podczas krojenia. Po zamontowaniu stolika w komorze tnącej wypełnionej roztworem tnącym o temperaturze 4 stopni Celsjusza, przeciąć 320-mikronowe odcinki koronalne przez ciało migdałowate. Przetnij je na pół i zbierz sekcje w komorze interfejsu, tak jak poprzednio.