JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:59 min. • July 8th, 2025
Weźmy nieruchome odcinki mózgu myszy zawierające komórki nerwowe, w tym proliferowane nerwowe komórki macierzyste znakowane EdU, analogiem tymidyny.
Obrysuj sekcje hydrofobowym oznaczeniem, aby zapobiec rozprzestrzenianiu się roztworu.
Dodaj detergent, aby przepuszczalność tkanki. Umyj, aby usunąć nadmiar detergentu.
Dodaj fluorofor, aby oznaczyć EdU. Usuń nadmiar fluoroforów.
Za pomocą mikroskopu fluorescencyjnego potwierdź prawidłowe barwienie komórek znakowanych EdU.
Zastosuj bufor blokujący zawierający białka, aby zapobiec wiązaniu się przeciwciał nieswoistych. Usuń nadmiar białek.
Inkubacja z pierwotnymi przeciwciałami, które wiążą się ze specyficznymi białkami w nerwowych komórkach macierzystych. Usunąć niezwiązane przeciwciała.
Dodaj przeciwciała drugorzędowe sprzężone z fluoroforem, aby związać przeciwciała pierwszorzędowe. Zmyć niezwiązane przeciwciała.
Zabarwić jądra barwnikiem i usunąć nadmiar barwnika.
Usuń oznaczenie hydrofobowe, nałóż media montażowe i umieść szkiełko nakrywkowe.
Za pomocą mikroskopu konfokalnego obserwuj sekcje, aby uwidocznić oznakowane nerwowe komórki macierzyste.
Aby zabarwić skrawki tkanki analogiem tymidyny, należy usunąć skrawki tkanki z buforu
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych