JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:46 min. • July 8th, 2025
Weźmy nieruchomy wycinek tkanki mózgowej myszy zawierający nieliczną populację astrocytów wykazujących ekspresję białka fluorescencyjnego.
Potraktuj swobodnie pływającą sekcję buforem zawierającym detergent, aby przepuszczalność komórek.
Inkubować sekcję w buforze blokującym, aby zapobiec niespecyficznemu wiązaniu przeciwciał.
Potraktuj sekcję przeciwciałami pierwszorzędowymi i inkubuj, aby przeciwciała mogły związać się z białkami fluorescencyjnymi w astrocytach.
Zmyć nadmiar przeciwciał pierwszorzędowych za pomocą buforu.
Następnie inkubuj sekcję z przeciwciałami drugorzędowymi znakowanymi fluoroforem, które wiążą się z przeciwciałami pierwszorzędowymi.
Niezwiązane przeciwciała drugorzędowe zmyć buforem.
Przenieś sekcję do mieszaniny wody dejonizowanej buforem, aby usunąć pozostałości detergentu.
Umieść sekcję na szkiełku zawierającym wodę dejonizowaną buforem. Usuń nadmiar płynu i dodaj nośnik montażowy. Następnie umieść szkiełko nakrywkowe i zabezpiecz je.
Na koniec użyj mikroskopii konfokalnej, aby uwidocznić znakowane astrocyty fluorescencyjne wyrażające białko w sekcji.
Na początek przygotuj świeży roztwór TBST, dodając 1 mililitr 10% Triton X do 50-mililitrowej probówki i w
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych