Kwantyfikacja rozmieszczenia białka presynaptycznego w mózgu myszy za pomocą immunofluorescencji
JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:59 min. • July 8th, 2025
Weź chemicznie utrwalony wycinek mózgu myszy osadzony w podłożu zawierającym tkanki.
Umyj plasterek buforem, aby usunąć pożywkę.
Dodaj roztwór, który przenika przez błony i blokuje niespecyficzne miejsca wiązania.
Usuń roztwór.
Aby uwidocznić neuronalne białka synaptyczne, inkubuj wycinek z pierwszorzędowymi przeciwciałami.
Przeciwciała te są ukierunkowane na białko presynaptyczne ulegające ekspresji w synapsach określonych regionów mózgu i wszechobecnie wyrażane białko synaptyczne jako marker odniesienia.
Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał.
Wprowadź przeciwciała drugorzędowe znakowane fluoroforem, które są ukierunkowane na przeciwciała pierwszorzędowe.
Przemyć buforem w celu usunięcia niezwiązanych przeciwciał drugorzędowych.
Przeciwbarwić jądra barwnikiem wiążącym DNA.
Umyj z buforem i umieść plasterek za pomocą odpowiedniego medium montażowego.
Wizualizuj plasterek pod mikroskopem konfokalnym.
Oblicz średnie współczynniki intensywności fluorescencji białka docelowego i markera referencyjnego, aby przeanalizować rozkład białka docelowego w różnych regionach mózgu.
Aby przygotować plastry do barwienia immunologicznego, użyj plastikowej pipety, aby usunąć ro
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych