JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 3:16 min. • June 17th, 2025
Weźmy wybarwiony immunologicznie wycinek mózgu myszy z fluorescencyjnie znakowanymi astrocytami. Cytoplazma astrocytu fluoryzuje na czerwono, podczas gdy jądro fluoryzuje na niebiesko.
Umieść szkiełko na stoliku mikroskopu konfokalnego pod odpowiednią soczewką obiektywu.
Korzystając z oprogramowania do akwizycji, dostosuj ostrość i wybierz fluorofory oznaczające cytoplazmę astrocytu i jądro.
Rozpocznij obrazowanie na żywo i zoptymalizuj parametry obrazowania, aby zredukować szumy w pozyskanym obrazie.
W obszarze Parametry akwizycji wybierz tryb skanowania o niskiej szybkości, aby uzyskać obraz dwuwymiarowy o wyższej jakości.
Zidentyfikuj najwyższą pozycję astrocytu jako punkt początkowy dla stosu Z, a najniższą pozycję jako punkt końcowy.
Określ liczbę plasterków pokrywających całą głębokość komórki.
Scal plasterki, aby wygenerować trójwymiarowy obraz astrocytu.
Aby rozpocząć mikroskopię konfokalną, umieść szkiełko na stoliku mikroskopu i wybierz obiektyw 63x. Po otwarciu oprogramowania Acquisition kliknij Smart Setup w zakładce Acquisition i wybierz odpowiednie fluorofory. Tutaj używane są DAPI i Alexa Fluor 555.
Następnie kliknij Najlepszy sygnał, a następnie Zastosuj. Następnie kliknij
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych