Analiza dynamiki wapnia i zmian potencjału błonowego w śródbłonku tętniczym myszy

0 views • 2:38 min • April 28th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zabezpiecz śródbłonek tętniczki pobrany z mózgu myszy w komorze z ciągłym przepływem buforowym.

Umieść komorę w konfiguracji nagrywania.

Wprowadź wrażliwy na wapń barwnik fluorescencyjny. Inkubować, aby umożliwić komórkowy wychwyt barwnika.

Umyj, aby usunąć wszelkie niezinternalizowane barwniki.

Włóż elektrodę do komórki śródbłonka i zarejestruj spoczynkowy potencjał błony.

Podnieś temperaturę kąpieli do temperatury fizjologicznej, aby ułatwić wewnątrzkomórkowe wiązanie wapnia z barwnikiem.

Wzbudz barwnik i zmierz fluorescencję, aby określić ilościowo wyjściowy poziom wapnia w komórkach.

Wprowadź lek, który wiąże się ze specyficznymi receptorami sprzężonymi z białkiem G na komórkach śródbłonka, inicjując kaskadę sygnalizacyjną.

Ta kaskada uwalnia jony wapnia z retikulum endoplazmatycznego do cytoplazmy, zwiększając wiązanie wapnia z barwnikiem i fluorescencję.

Podwyższony poziom wapnia w cytoplazmacie aktywuje również kanały potasowe, ułatwiając odpływ jonów potasu i zmniejszając potencjał błony.

Zapisz dane.

Zwiększona fluorescencja i zmniejszony potencjał błonowy wskazują na funkcjonalną rurkę śródbłonka.

Aby zmierzyć potencjał błony śródbłonkowej, patrząc przez czterokrotny obiektyw, ostrożnie umieść ostrą końcówkę elektrody tuż nad komórką śródbłonka tętniczego w przepływającym roztworze soli fizjologicznej za pomocą mikromanipulatora. Stopniowo zwiększaj powiększenie do 400 razy i w razie potrzeby zmień położenie końcówki elektrody. Za pomocą mikromanipulatora delikatnie włóż końcówkę ostrej elektrody do jednej z komórek rurki śródbłonka i rozpocznij rejestrację VM za pomocą elektrometru.

Gdy VM spoczynku śródbłonka ustabilizuje się z minus 30 do minus 40 miliwoltów, zastosuj pożądane środki farmakologiczne zgodnie z celem eksperymentalnym. Załaduj rurkę śródbłonka za pomocą urządzenia do śledzenia fluorescencji błony plazmatycznej lub pożądanych organelli w temperaturze 37 stopni Celsjusza przez 15 do 30 minut. Umyj komórki świeżym roztworem soli fizjologicznej superfuzyjnej i zobrazuj żywe komórki pod mikroskopem przy długości fali wzbudzenia odpowiednich barwników.

06:15

Ocena funkcji bioenergetycznych w komórkach śródbłonka naczyń mózgowych

Related Videos

0 Views

10:54

Izolacja ludzkich komórek śródbłonka z normalnego raka jelita grubego i raka jelita grubego - ulepszony protokół

Related Videos

0 Views

09:45

Jednoczesne pomiary wewnątrzkomórkowego potencjału wapnia i błony w świeżo wyizolowanym i nienaruszonym śródbłonku mózgowym myszy

Related Videos

0 Views

07:22

Jednoczesny pomiar wewnątrzkomórkowego potencjału wapnia i błony w śródbłonku mózgu myszy

Related Videos

0 Views

09:23

Izolacja śródbłonka mikronaczyniowego z tętnic oporowych myszy

Related Videos

0 Views

06:49

Automatyczna analiza dynamicznych sygnałów Ca2+ w sekwencjach obrazów

Related Videos

0 Views

08:08

Obrazowanie dwufotonowe wewnątrzkomórkowego obchodzenia się z Ca2+ i produkcji tlenku azotu w komórkach śródbłonka i mięśni gładkich izolowanej aorty szczurzej

Related Videos

0 Views

12:19

Analiza jednokanałowa i obrazowanie wapnia w podocytach świeżo wyizolowanych kłębuszków nerkowych

Related Videos

0 Views

06:32

Metoda przebijania mikroelektrod w celu zarejestrowania potencjału błony z kaniulowanej tętnicy środkowej mózgu

Related Videos

0 Views

07:16

Dynamiczny pomiar i obrazowanie naczyń włosowatych, tętniczek i perycytów w sercu myszy

Related Videos

0 Views

Last updated: 27 June 2026