Analiza dynamiki wapnia i zmian potencjału błonowego w śródbłonku tętniczym myszy

Zabezpiecz śródbłonek tętniczki pobrany z mózgu myszy w komorze z ciągłym przepływem buforowym.

Umieść komorę w konfiguracji nagrywania.

Wprowadź wrażliwy na wapń barwnik fluorescencyjny. Inkubować, aby umożliwić komórkowy wychwyt barwnika.

Umyj, aby usunąć wszelkie niezinternalizowane barwniki.

Włóż elektrodę do komórki śródbłonka i zarejestruj spoczynkowy potencjał błony.

Podnieś temperaturę kąpieli do temperatury fizjologicznej, aby ułatwić wewnątrzkomórkowe wiązanie wapnia z barwnikiem.

Wzbudz barwnik i zmierz fluorescencję, aby określić ilościowo wyjściowy poziom wapnia w komórkach.

Wprowadź lek, który wiąże się ze specyficznymi receptorami sprzężonymi z białkiem G na komórkach śródbłonka, inicjując kaskadę sygnalizacyjną.

Ta kaskada uwalnia jony wapnia z retikulum endoplazmatycznego do cytoplazmy, zwiększając wiązanie wapnia z barwnikiem i fluorescencję.

Podwyższony poziom wapnia w cytoplazmacie aktywuje również kanały potasowe, ułatwiając odpływ jonów potasu i zmniejszając potencjał błony.

Zapisz dane.

Zwiększona fluorescencja i zmniejszony potencjał błonowy wskazują na funkcjonalną rurkę śródbłonka.

Aby zmierzyć potencjał błony śródbłonkowej, patrząc przez czterokrotny obiektyw, ostr