Analiza struktur amyloidowych w skrawku tkanki przy użyciu mikroskopii obrazowania czasu życia fluorescencji

Weź wycinek tkanki z agregatami amyloidu reprezentującymi nieprawidłowe złogi białka.

Tkanka jest barwiona barwnikiem fluorescencyjnym heptamer-formyl tiofenem octowym lub hFTAA, który wiąże się specyficznie ze strukturami beta-arkuszowymi włókien amyloidowych.

Zobrazuj szkiełko za pomocą mikroskopu konfokalnego wyposażonego w jednostkę do obrazowania czasu życia fluorescencji, która mierzy czas życia fluorescencji cząsteczek barwnika.

Zoptymalizuj ustawienia mikroskopu pod kątem efektywnego wzbudzania cząsteczek barwnika.

Gdy światło lasera oświetla tkankę, hFTAA wzbudza się i fluoryzuje.

Silniejsze wiązanie barwnikiem w strukturach zwartych skutkuje dłuższą żywotnością, podczas gdy słabsze wiązanie barwnikiem w mniej zwartych strukturach prowadzi do krótszych żywotów.

Później oprogramowanie generuje obraz agregacji oznaczony kolorami.

Kolory, takie jak czerwony i żółty, pojawiają się na obrzeżach, wskazując na krótsze czasy życia fluorescencji, które odzwierciedlają mniej zwarte, niestabilne struktury amyloidowe.

Podczas gdy kolory takie jak niebieski i zielony w rdzeniu reprezentują dłuższe czasy życia fluorescencji, odzwierciedlając bardziej zwarte i stabilne struktury amyloidowe.