JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:28 min. • April 28th, 2025
Umieść wycinek mózgu myszy w komorze perfuzyjnej zawierającej płyn mózgowy pod mikroskopem dwufotonowym.
Mysz jest genetycznie zmodyfikowana do ekspresji GFP w mikrogleju, umożliwiając śledzenie ruchu mikrogleju.
Zabezpiecz plasterek za pomocą uchwytu.
Korzystając z oświetlenia w jasnym polu, zlokalizuj obszar zainteresowania.
Przełącz się na oświetlenie fluorescencyjne, aby uwidocznić mikroglej.
Napełnij mikropipetę badanym związkiem, zamontuj ją na uchwycie strzykawki i opuść, aby dotknąć plasterka.
Aktywuj tryb obrazowania dwufotonowego, skupiając niskoenergetyczne światło w bliskiej podczerwieni w tkance.
W ognisku lasera dwa fotony łączą swoją energię, aby wzbudzić GFP, emitując fluorescencję.
Rób zdjęcia w wielu płaszczyznach Z, aby skupić się na procesach mikrogleju.
Zarejestruj aktywność wyjściową, a następnie wstrzyknij związek i kontynuuj rejestrację.
Związek wiąże się z receptorami mikrogleju, uruchamiając szlaki sygnałowe, które napędzają rozszerzenie procesu mikrogleju w kierunku źródła związku.
Monitoruj wzrost fluorescencji w pobliżu miejsca wstrzyknięcia w czasie, aby śledzić ruch.
30 minut przed rozpoczęciem nagrywania podłącz pompę perystaltyczną do dostosowanej komory reje
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych