JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 4:14 min. • May 29th, 2025
Weźmy komorę obrazowania zawierającą unieruchomioną tkankę splotu mięśniowo-jelitowego okrężnicy myszy, w której znajdują się zwojowe sploty zbudowane z sieci neuronów jelitowych i komórek glejowych.
Komórki te są oznaczone wskaźnikiem wapnia, który fluoryzuje po związaniu wapnia.
Następnie umieść komorę na stoliku mikroskopu fluorescencyjnego. Perfekować komorę wstępnie podgrzanym buforem zawierającym inhibitory tłumiące skurcze mięśni podczas obrazowania.
Za pomocą mikroskopu zidentyfikuj zdrowe obszary zwojowe, które wykazują jednolitą fluorescencję.
Pozyskaj obrazy fluorescencyjne, aby zmierzyć aktywność wyjściową, zapewniając odniesienie dla wewnątrzkomórkowego poziomu wapnia.
Perfuzja tkanki za pomocą agonisty receptora w celu aktywacji receptorów neuronalnych, co powoduje wewnątrzkomórkowy napływ wapnia i wzrost intensywności fluorescencji.
Aktywacja neuronalna pośrednio stymuluje otaczające komórki glejowe, prowadząc do napływu wapnia, a następnie wzrostu fluorescencji.
Przechwytuj poklatkowe obrazy fluorescencyjne, aby mierzyć zmiany intensywności fluorescencji, które wskazują na dynamikę wapnia i aktywność sygnalizacyjną zarówno w neuronach, jak i komórkach glejowych w stosunku
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych