JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:40 min. • May 29th, 2025
Weźmy chemicznie utrwalony i oczyszczony segment tkanki z transgenicznego zarodka myszy wykazującego ekspresję białka zielonej fluorescencji (GFP) w neuronach ruchowych rdzenia.
Zamontuj chusteczkę pionowo na zmodyfikowanej końcówce pipety.
Przymocuj końcówkę do kapilary zabezpieczonej w mikroskopie fluorescencyjnym z arkuszem światła.
Umieść wypełnioną buforem komorę na próbkę pod tkanką, aby ją zanurzyć i usunąć zanieczyszczenia.
Za pomocą oprogramowania do obrazowania wyrównaj tkankę na ścieżce światła.
Rozpocznij akwizycję obrazu.
Źródło światła emituje cienką warstwę światła laserowego, wzbudzając GFP w jednej płaszczyźnie tkanki, emitując fluorescencję.
Detektor umieszczony prostopadle do ścieżki światła wychwytuje emitowaną fluorescencję.
Uzyskaj obrazy neuronów ruchowych rdzenia, aby wygenerować rekonstrukcję 3D morfologii rozgałęzień aksonalnych.
Używaj oprogramowania do mapowania aksonów, identyfikowania wzorców rozgałęzień i punktów końcowych w celu oceny wzrostu neuronów ruchowych i łączności.
Ustaw optykę 5X/0,1 oświetlenia i optykę detekcji 5X/0,16. Zamontować uchwyt na próbkę i kapilarę próbki. Przygotować komorę na próbkę, wypełniając ją roztworem czyszczącym. Aby zamontowa
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych