JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 5:13 min. • May 29th, 2025
Weź podgrzany roztwór agarozy zawierający znieczuloną transgeniczną larwę danio pręgowanego wyrażającą białko fluorescencyjne w neuronach ruchowych rdzenia.
Przenieś larwę do szklanego naczynia z pierścieniem agarozowym.
Za pomocą mikroskopu obróć larwę na bok. Następnie pozwól agarozie zestalić się, unieruchamiając larwę.
Dodaj bufor zawierający środek znieczulający, aby utrzymać znieczulenie.
Umieść czaszę na stoliku mikroskopu konfokalnego i użyj obrazowania w jasnym polu, aby zlokalizować grzbietowy obszar rdzenia kręgowego.
Przełącz się w tryb fluorescencji, aby uwidocznić fluorescencyjne neurony ruchowe.
Określ centralną płaszczyznę Z somy komórkowej w celu precyzyjnego ukierunkowania ablacji.
Skonfiguruj parametry obrazowania w celu uzyskania wysokiej rozdzielczości, jednocześnie minimalizując fotouszkodzenia.
Gdy pożądana płaszczyzna z jest już ostra, wykonaj ablację w docelowym obszarze neuronu za pomocą skupionego lasera ultrafioletowego.
Energia lasera zaburza struktury komórkowe, powodując utratę fluorescencji i śmierć komórki. Nieodwracalna utrata fluorescencji potwierdza precyzyjną ablację bez wpływu na otaczające komórki.
Użyj regulowanej pipety, aby wyciągnąć larwę i po
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych