Wizualizacja migracji komórek grzebienia nerwowego w zarodku danio pręgowanego za pomocą wielofotonowego obrazowania poklatkowego

Zacznij od żywego, zdechorionowanego transgenicznego zarodka danio pręgowanego osadzonego w agarozie o niskiej temperaturze topnienia i umieszczonego w komorze wypełnionej pożywką zarodkową.

Zarodek wykazuje ekspresję komórek grzebienia nerwowego znakowanych białkiem zielonej fluorescencji (EGFP).

Ustaw komorę na stoliku mikroskopu. Korzystając z oświetlenia jasnego pola, wyreguluj obiektyw, aby ustawić ostrość i wyśrodkować zarodek w polu view.

Przełącz się na obiektyw zanurzenia w wodzie i ponownie skup się na zarodku.

Dostosuj parametry obrazowania, aby uzyskać obrazy stosu Z od krawędzi bocznej do przyśrodkowej, rejestrując szerokość oka.

Wyłącz oświetlenie w jasnym polu, zakryj scenę i rozpocznij obrazowanie poklatkowe.

W razie potrzeby napełnij komorę mediami podczas obrazowania.

Pod wpływem oświetlenia laserowego komórki grzebienia nerwowego fluoryzują.

Wizualizuj migrację tych komórek z cewy nerwowej do obszarów twarzoczaszki, wokół rozwijającego się oka, aby wypełnić mezenchymę okołogałkową i wyrostek czołowo-nosowy oraz brzusznie, aby utworzyć łuki gardłowe.

Po umieszczeniu całego zestawu na stoliku mikroskopu, zgodnie z protokołem tekstowym, użyj pięciokrotnego obiektywu, aby zl