JoVE Encyklopedia Eksperymentów
Neuronauka
0 wyświetleń • 2:51 min. • June 17th, 2025
Rozpocznij od mikroskopu z pełnym wewnętrznym odbiciem fluorescencyjnym (TIRF) z zakrytą komorą obrazowania zawierającą szklane szkiełko nakrywkowe z przylegającymi ludzkimi komórkami nerwiaka zarodkowego w buforze.
Komórki te wyrażają fluorofory specyficzne dla błon pęcherzyków synaptycznych.
W trybie epifluorescencji wybierz komórkę do obrazowania.
W trybie TIRF przez obiektyw skieruj laser na próbkę, pojawiając się jako plamka na okładce.
Dostosuj kąt, aby przekroczyć kąt krytyczny na granicy faz między szkiełkiem nakrywkowym o wysokim współczynniku załamania światła a próbką o niższym współczynniku załamania światła, powodując całkowite wewnętrzne odbicie (TIR), widziane jako cienka linia.
TIR generuje ulotną falę, która wzbudza fluorofory na najbliższej błonie.
Emitowana fluorescencja jest zbierana przez obiektyw i rejestrowana przez kamerę.
Dostosuj do ustawienia, aby uzyskać obraz błony komórkowej o wysokim kontraście w pobliżu szkiełka nakrywkowego.
Zoptymalizuj ustawienia akwizycji, aby zminimalizować fotowybielanie i ustawić częstotliwość próbkowania.
Rozpocznij obrazowanie TIRF, aby uwidocznić połączone pęcherzyki synaptyczne.
W trybie epifluorescencji skup się na szkiełku nakryw
Wyświetl pełny transkrypt i uzyskaj dostęp do tysięcy filmów naukowych