Multipleksowana platforma przesiewowa oparta na lucyferazie do badania transdukcji sygnału związanego z rakiem w hodowanych komórkach

Ogólnym celem poniższego protokołu jest umożliwienie badania funkcji genów w skali genomu poprzez jednoczesne monitorowanie wielu odczytów komórkowych. W tej demonstracji reportery oparte na Firefly RAN i lucyferazie Cipro Dina są używane do monitorowania aktywności szlaku P 53 WINT i KRAS. Ci trzej reporterzy są transektowani za pomocą irna, którego celem jest gen będący przedmiotem zainteresowania w HCT 16 komórek, linii komórkowej raka jelita grubego.

Następnie w lizatach komórkowych mierzy się aktywność lucyferazy świetlika i wanilii, podczas gdy aktywność lucyferazy Cipro DEA. Wydzielany enzym jest mierzony w kulturze. Uzyskuje się wyniki pożywki, które pokazują odtwarzalność systemu testowego, a także zdolność do ujawnienia wspólnych i unikalnych działań genów w obrębie tych trzech szlaków istotnych dla raka.