Techniki przetwarzania oczu z wszczepioną protezą siatkówki do miejscowej analizy histopatologicznej: Część 2 Implanty nasiatkówkowe z pinezkami siatkówkowymi

Protezy siatkówki z elementami z twardego metalu nie są kompatybilne z tradycyjnymi procesami histologicznymi. Tutaj opisujemy techniki oceny stanu zdrowia oka bezpośrednio przylegającego do implantu siatkówki zabezpieczonego metalowym T. Osiąga się to poprzez najpierw zarodkowanie i unieruchomienie oka zgodnie z protokołem opisanym w filmie towarzyszącym, a następnie wypreparowanie próbki tkanki, która obejmuje implant i T siatkówki. Drugim krokiem jest stopniowe odwadnianie próbki tkanki, a następnie osadzenie jej w żywicy epoksydowej w żądaną orientację za pomocą dwuetapowego procesu osadzania. Następnie końcowy blok żywicy jest montowany w specjalnym uchwycie i stopniowo szlifowany, aż przekrój poprzeczny przez implant i otaczającą tkankę oka zostanie odsłonięty na pożądanym poziomie.

Ostatnim krokiem jest wybarwienie powierzchni odsłoniętej tkanki, a następnie zobrazowanie i sfotografowanie za pomocą mikroskopu preparacyjnego o dużej mocy w celu wizualizacji architektury komórkowej przylegającej do wszczepionej protezy. Kroki te są następnie powtarzane kilka razy w razie potrzeby. Ostatecznie pobierana jest seria obrazów przekrojowych próbki tkanki, w tym implantu in situ, które mogą być wykorzystane do udoskonalenia projektu urządzenia lub zabiegu chirurgicznego, a także do oceny bezpieczeństwa danej protezy.

Główną zaletą tej techniki w porównaniu z istniejącymi metodami, takimi jak tradycyjna histologia cięcia oparta na ostrzu, jest to, że obiekty z wszczepionym sercem, w tym elementy metalowe, mogą pozostać na miejscu podczas zabiegu, co pozwala na wizualizację interfejsu tkanki implantu. Metoda ta może odpowiedzieć na kluczowe pytania w dziedzinie protez siatkówki, takie jak ocena integralności strukturalnej delikatnej tkanki oka przylegającej do wszczepionej protezy siatkówki. Po wyłuszczeniu oka i unieruchomieniu zgodnie z opisem w towarzyszącym filmie JoVE, wizualizuj implant i punkt, w którym jest on przymocowany na zewnątrz oka.

Za pomocą ostrza 15 stopni. Wykonaj obwodowe nacięcie transrogówki i zdejmij osłonkę rogówki, aby odsłonić wnętrze gałki ocznej. Należy pamiętać, że soczewka została wcześniej usunięta podczas witrektomii lensectomii, która jest częścią zabiegu chirurgicznego tego implantu nasiatkówkowego.

Następnie włóż tęczówkę i wszelkie pozostałe włókna Z soczewki, aby odsłonić tylną komorę z implantem nasiatkówkowym i metalowym T in situ. W zależności od implantu i wykonywanego badania, przed dalszą sekcją należy usunąć obce elementy. W niniejszym przykładzie oceniana matryca epiretinalna składa się z prototypu hermetycznego, diamentowego pakietu elektrody i elektroniki umieszczonego w konforemnym nośniku silikonowym.

Ostrożnie przeciąć próbkę, która zawiera sczepianie i otaczającą tkankę w pożądanej orientacji. Użyj cienkich nożyczek preparacyjnych, aby wyciąć paski o pełnej grubości z tyłu oka, w tym twardówkę, naczyniówkę i siatkówkę. Tutaj ostrożnie wyjmij pakiet elektrod diamentowych przez dokładne rozwarstwienie skalpelem.

Pozostaw silikonowy korpus implantu wraz z przyczepnością siatkówki i resztkami platynowego okablowania. Pobrać próbkę, która daje podłużny przekrój poprzeczny sczepnej części sczepnej, ukazujący wszystkie warstwy siatkówki przylegające do sczepności. Następnie zwróć próbkę do 70% etanolu.

Odwadniać próbkę przez trzy dni w stopniowych etapach etanolu. Najpierw odwadniaj próbkę w 70% etanolu przez dwie godziny, dwa razy. Następnie dwukrotnie odwodnić próbkę w 80% etanolu przez dwie godziny, a następnie w nocy następnego dnia odwodnić próbkę w 90% etanolu przez dwie godziny dwa razy, przystąpić próbkę w 100% etanolu przez dwie godziny dwa razy, a następnie przez noc.

Na koniec dwukrotnie odwodnić próbkę w 100% acetonie przez dwie godziny. Wyjmij próbkę z acetonu i obserwuj ją pod mikroskopem świetlnym, jak wysycha na powietrzu w temperaturze pokojowej. Usunięcie płynu z tkanek miękkich powoduje zapadanie się komórek i kurczenie się.

Próbka zostanie przeniesiona do żywicy epoksydowej tuż przed tym, jak zacznie się zwijać i zapadać. Zrozumienie, kiedy dochodzi do zwijania się i zapadania tkanki, rozwija się wraz z doświadczeniem. Aby zanurzyć próbkę w przezroczystej żywicy epoksydowej, zanurz tkankę oka w upłynnionej żywicy epoksydowej w odpowiednim zamykanym pojemniku.

Delikatnie odgazuj żywicę epoksydową w komorze próżniowej i pozostaw ją na noc w temperaturze pokojowej do utwardzenia. Należy zwrócić uwagę, aby osadzić próbkę w żądanej orientacji, zmieniając rozmiar utwardzonej żywicy epoksydowej i próbki za pomocą piły taśmowej i stroika Blok o zmienionym rozmiarze zawierający tkankę oka w świeżej skroplonej żywicy epoksydowej tak, aby długa oś przyczepności była zorientowana równolegle do dna formy. Użyj miejsca super kleju, aby przymocować próbkę o zmienionym rozmiarze do dolnej części uchwytu próbki.

Napełnij uchwyt próbki płynną żywicą epoksydową i odgazuj jak poprzednio, pozostaw do utwardzenia na noc. Następnie zamontuj żywicę w uchwycie na próbkę do mielenia i ręcznie zmiel próbkę z prędkością od 230 do 250 obr./min z wodą za pomocą papieru z węglika krzemu. W celu barwienia zanurz powierzchnię ziemi w niebieskiej plamie na trzy do pięciu minut lub do momentu powstania plamy.

Po spłukaniu próbki wodą z kranu należy zobrazować powierzchnię gruntu próbki za pomocą preparacji o większej mocy. Zakres. Aby uwidocznić warstwy komórkowe siatkówki, nałóż kroplę wody destylowanej na górną powierzchnię żywicy epoksydowej tuż nad próbką. Aby wygładzić dyfrakcję na granicy faz żywicy epoksydowej.

Użyj światłowodowego źródła światła na gęsiej szyi, aby oświetlić próbkę. Powtórz etapy mielenia i obrazowania za każdym razem, gdy mielisz zadaną grubość próbki. Minimalny precyzyjny i powtarzalny przyrost mielenia uchwytu próbki wynosi 20 mikronów.

Proces ten powtarza się stopniowo, aż przekrój przez implant i otaczającą tkankę oka zostanie odsłonięty na pożądanym poziomie. Pokazano. Oto przykładowe obrazy tkanki siatkówki uwidocznionej bezpośrednio w sąsiedztwie tytanowej siatkówki T w różnych punktach podczas procesu mielenia. Obrazy pokazują podłużne odcinki halsu przenikające przez oko i wychodzące z twardówki przylegającej do silikonu i toluidyny zabarwionej na niebiesko i niebarwionej siatkówki.

Niesztuczne odwarstwienie i fałdowanie siatkówki można zobaczyć po obu stronach silikonu zarówno przy niskiej, jak i dużej mocy. Widoczny jest wałek halsowy osadzony w silikonie, a główka halsu przeniknęła do siatkówki i twardówki. Tutaj oczywiste jest, że w niezabarwionej siatkówce po obu stronach silikonu występuje niesztuczne odwarstwienie siatkówki, które jest uwidocznione zarówno przy niskiej, jak i wysokiej mocy.

Przykład pokazał, że po jednej stronie występuje dezorganizacja siatkówki przylegająca do halsu i ucisku siatkówki z powodu ukośnego kąta wprowadzenia. Próbując wykonać tę procedurę, należy pamiętać o starannym osadzeniu, orientacji i trzcinowaniu próbki, tak aby powstałe powierzchnie gruntu wyrównały się w pożądanym planie. Ponadto na każdym etapie mielenia należy wykonać wiele zdjęć, ponieważ obecnie nie można odzyskać próbek gruntu.

Metoda ta może dostarczyć informacji na temat histologii protez siatkówki. Może być również stosowany do wizualizacji interfejsu tkankowego urządzenia w innych systemach, które wykorzystują twarde wszczepione komponenty, takie jak głębokie implanty mózgu, stenty naczyniowe lub protezy ortopedyczne.